Stripping di membrane di Western Blotting

Descrizione

Una volta rilevata una certa proteina da una membrana di nitrocellulosa di un Western blotting, possibile riutilizzare questa membrana per l'analisi di un altra proteina.
quindi necessario rimuovere gli anticorpi legati alla membrana (processo detto stripping) e riincubarla con il nuovo anticorpo.
possibile eseguire lo stripping pi volte, ma generalmente dopo 2 o 3 il segnale diventa molto debole e si comincia ad avere molto rumore di fondo.

  • Incubare la membrana a 50 C per 30 minuti in stripping buffer



  • Consiglio
    A questo punto si pu trattare la membrana come in seguito al blotting.



  • Incubare in 5% BSA o latte in PBS + 0.1% Tween 20 (PBS-T)


  • Lavare 3 volte per 5-10 minuti con PBS-T


  • Incubare sullo shaker con l'anticorpo primario a 4 C overnight o 1-2 ore a T ambiente.


  • Lavare 3 volte per 5-10 minuti con PBS-T


  • Incubare sullo shaker con l'anticorpo secondario 1 ora a T ambiente.


  • Lavare 3 volte per 5-10 minuti con PBS-T


  • Procedere con il rilevamento