Mini prep

Descrizione

questo protocollo serve ad estrarre il DNA trasformato in cellule competenti

  • Prendere le cellule fatte crescere per una notte a 37C e in movimento (225rpm) in 6ml di LB + 6 µl di Ampicilina.


  • Mettere 1.5ml di cellule in un tubo Eppendorf.


  • Spinnare a 14.000 rpm per 30 secondi.


  • Buttare il sopranatante e risospendere il pellet in 100microl di TELT Buffer.


  • Aggiungere 100microl di fenolo-cloroformio, vortexare.


  • Centrifugare a 14.000 rpm per 10 minuti.


  • Prendere il sopranatante e metterlo in un nuovo tubo Eppendorf.


  • Aggiungere 2.5 volumi di etanolo 100% e mixare


  • Mettere a -20C per un'ora.


  • Centrifugare a 14.000 rpm per 10 minuti.


  • Risospendere il pellet con etanolo 70%.


  • Spinnare per un minuto circa


  • Risospendere in pellet in 25 µl di ddH2O.