Protocollo - SDS extraction buffer

SDS extraction buffer

Descrizione

Ho usato questo protocollo per fare un'estrazione di proteine dalla frazione cellulare insolubile, quindi dalla membrana.

Una volta lisate le cellule e centrifugate per separare l'estratto dalla porzione insolubile, ho recuperato il pellet e l'ho lavorato con questo buffer, riuscendo ad estrarre una grande quantità di proteine di membrana.

Consiglio

Un unico accorgimento: se usate questo buffer, fatelo agire almeno per 30 minuti a 4 °C, e poi passate il tutto attraverso un ago da insulina per 4-5 volte. Lavorate poi come se stesse facendo una semplice estrazione.

HEPES pH 7.4 25mM
EDTA 4mM
SDS 1%
NaF 25mM
Na-pirofosfato 10mM
Inibitori delle proteasi all’uso (Na3VO4 1mM, LAP 1X, PMSF 1mM, Aprotinina 1X)
NB:il LAP è un cocktail di inibitori di una nota casa farmaceutica, venduto in pasticche da sciogliere in dH2O-concentrazione 50X-