Batteri Competenti (per elettroporazione)

Descrizione

Classico protocollo per ottenere cellule competenti da trasformare via elettroporazione.

  • Crescere un inoculo di cellule ON in 10 ml di LB, a 37C (o a 30C a seconda del ceppo )


  • Diluire il precedente inoculo in 1 litro di LB


  • Crescere a 37C ( o 30C ) fino a OD600 =0.6


  • Incubare le cellule in ghiaccio per 15-30 min.


  • Centrifugare a 5000 rpm per 15 min a 4C


  • Risospendere il pellet di batteri in 1 litro di dH2O precedentemente raffreddata


  • Centrifugare a 5000 rpm per 15 min.


  • Risospendere il pellet in 500 ml di dH2O precedentemente raffreddata


  • Centrifugare a 5000 rpm a 4C.


  • Risospendere in 20 ml di 10% Glicerolo


  • Centrifugare a 5000 rpm a 4C


  • Risospendere in 2 ml di 10% Glicerolo


  • Fare aliquote da 100 l, congelare rapidamente in azoto liquido o ghiaccio secco.


  • Conservare a -80C



  • Consiglio
    Utilizzare materiale sterile.