Quando le neurosfere raggiungono grandi dimensioni, si procede alla loro dissociazione:

- Si preleva circa una ventina di neurosfere, tra le più grandi, che vengono poste in provette da 20 ml.

- Si centrifuga a 900 rpm per 5 minuti.

- Si elimina il sovranatante.

- Si utilizza quindi un kit di dissociazione costituito dalle 3 soluzioni A, B e C:

• Aggiungere al pellet 0,5 ml di soluzione A e risospendere con una pipetta pasteur.
• Aggiungere 0,125 ml di soluzione B (contenente basi deboli) e lasciar agire per 8 minuti.
• Al 3° e 7° minuto e risospendere con una pipetta pasteur 8 volte.
• Aggiungere 0,04 ml di soluzione C (contenente acidi deboli) e risospendere con una pipetta pasteur 8 volte.
• Aggiungere il terreno di coltura.


- Completato questo passaggio, si passa all’aggiunta di un ulteriore volume di mezzo di coltura e al piastramento.