Eluizione del DNA dal gel di agarosio.
Descrizione
permette di estrarre DNA dalle bande del gel di agarosio
Escidere la banda contenente l’amplificato con un bisturiEluire il DNA in 150 µl di acqua mQ e lasciarlo a 4°C per 3 giorni.Aggiungere 75 µl di Eluition Buffer 2X (Na-acetato 0.5M a pH7 e EDTA 1mM a pH 8)Prelevare la soluzione a cui aggiungere isopropanolo-potassio acetato e lasciare per 2 ore a -20°CCentrifugare a 13.000 rpm(circa 15000G) per 15 minAggiungere al sedimento alcool al 70% e lasciare la soluzione per 2 ore a -20°CDopo essiccamento in Savant aggiungere al sedimento 100 µl di acqua mQ e un pari volume di cloroformio-alcool isoamilico 24:1 e centrifugare 10 min a 12.000 rpmPrelevare il surnatante e aggiungere 2 volumi di alcool 100% a freddoAgitare velocemente la soluzione sul vortex e porre a -80°C per due oreCentrifugare a 12.000 rpm per 10 minLavare in alcool 70% a freddoCentrifugare per 10 min a 12.000 rpm, decantare e savantareReidratare con 20 µl di acqua mQ.
