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ica88
Nuovo Arrivato
4 Messaggi |
 Inserito il - 16 febbraio 2011 : 14:26:43
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buongiorno a tutti,devo sostenere un esame di biologia molecolare e non riesco a risolvere un esercizio...mi viene data una sequenza di cDNA a doppio filamento con le 3 traduzioni possibili ,tra queste individuo l'ORF..premetto che non ho la possibilitā di utilizzare database informatici...il mio problema č che non so come identificare queste sequenze da utilizzare come primers, quale criterio utilizzare??grazie a tutti
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Ale_90
Utente Junior
296 Messaggi |
Inserito il - 16 febbraio 2011 : 15:15:23
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Per quale motivo devi amplificare questo cDNA? Se dovessi amplificarlo per poi clonarlo in un vettore di espressione, dovresti cercare un codon di inizio (ATG) e disegnare il forward primer in quella zona; per il reverse primer valuta tu, dipende da quanto č lungo questo cDNA e sempre dal motivo per cui devi amplificarlo....
Spero di essere stato chiaro :)
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ica88
Nuovo Arrivato
4 Messaggi |
Inserito il - 16 febbraio 2011 : 17:01:41
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| allora il cDNA č lungo circa 600pb, lo devo anplificare per clonarlo in vettore di espressione pGEX usando il sito sma1..per il primer forward sei stato molto chiaro grazie..mentre per il reverse in che modo posso valutarlo??oltre ad assicurarmi che non abbia parti complementari al forward primer?? |
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Ale_90
Utente Junior
296 Messaggi |
Inserito il - 16 febbraio 2011 : 22:32:13
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| Se devi tagliarlo con SmaI, cerca se hai un altro sito di restrizione al fondo del cDNA; se cosė fosse, potresti disegnare il reverse primer in quella zona... |
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0barra1
Utente Senior
Cittā: Paris, VIIčme arrondissement
3847 Messaggi |
Inserito il - 16 febbraio 2011 : 22:48:17
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| Possibilmente mai tagliare all'interno del DNA, meglio inserire i siti di restrizione con adattatori, linker o per l'appunto con PCR. |
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Ale_90
Utente Junior
296 Messaggi |
Inserito il - 17 febbraio 2011 : 11:40:45
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| Quindi dici di disegnare il reverse primer con una sequenza āncora contenente un sito SmaI? Poi disegni il primer sulla zona finale della sequenza codificante e cosė hai il cDNA bello che pronto per il clonaggio? |
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0barra1
Utente Senior
Cittā: Paris, VIIčme arrondissement
3847 Messaggi |
Inserito il - 17 febbraio 2011 : 14:06:22
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| Si, o visto che si parlava di espressione sarebbe ancora meglio diversificare i due primer per taglio con due diversi enzimi di restrizione. |
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come scegliere due primers?esame
Didattica
