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Cate90
Nuovo Arrivato
Città: Padova
38 Messaggi |
 Inserito il - 23 giugno 2015 : 22:47:50
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Ciao ragazzi, nel mio laboratorio stiamo avendo qualche problema con WB di lisati di Zebrafish.
I campioni da confrontare sono: 4 da cellule in coltura, 4 da Zebrafish wild type e 4 da Zebrafish mutanti.
Le proteine sono state estratte con RIPA più cocktail di inibitori di proteasi, quantificate con Bradford e caricate a 20ug su un gel 8% acrilammide.
PROBLEMA: quando facciamo il blot di tubulina o GAPDH per controllare le quantità caricate, troviamo bande coerenti tra i campioni provenienti da lisati cellulari. Mentre vi è un'alta e inspiegabile variabilità tra quelli estratti da Zebrafish 
Avendo ripetuto il Bradford diverse volte e confermato le quantità escludo errori nel saggio.
Ogni consiglio è ben accetto!!
Buonaserata :)
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WB da Lisati di Zebra
Didattica
