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Bemz
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 Inserito il - 02 marzo 2007 : 19:46:49
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Ciao a tutti!
Dopo anni di biologia molecolare di tutti i tipi mi trovo con un dubbio atavico che mi fa incavolare, perchè non riesco a capire alcuni miei risultati.
Allora partiamo dall'inizio: pUC18 può essere usato come vettore d'espressione perchè ha pLac e lacZ al cui interno posso clonare gene interesse. Devo però usare cells di E.coli particolari, come JM109 o XL1Blue, perchè permettono alfa complementazione e screening blue-bianco con IPTG e XGAL.
MA L'induzione, invece , avviene perchè l'IPTG lega il repressore, codificato da lacI.
Però lacI sul puC18 non c'è, perciò ipotizzo che si usino cells di JM109 etc non solo per la complementazione dell'alfa peptide ma anche perchè produrranno lacI->repressore. IPTG lega repressore, trascrizione dal pLAC libera.
E' così?
Ora io ho un vettore basato sul pUC18 , ha pLac e lacZ con dentro clonati i miei geni, se trasformo in un ceppo di Pseudomonas non vedo induzione con IPTG. Questo significa che in questo ceppo non c'è gene lacI, perciò non posso studiare l'induzione o meno in questo ceppo, giusto?
Se questo è corretto, e voi me lo confermate, ho capito i miei dubbi.
Io sapevo che col pUC18 e derivati bisognava clonare nelle JM109 etc per avere screening blu-bianco, e qui c'è l'alfa peptide di mezzo, non lacI.
Grazie mille....
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Didattica
Inserito il - 05 marzo 2007 : 14:21:32
Inserito il - 05 marzo 2007 : 14:31:29
