Mi rivolgo a tutti, vi prego aiutatemi se potete. Ho un esame a giorni di biologia molecolare applicata, ho dei dubbi inerenti alla chimica di reazione per verificare l'amplificato di una RT-PCR o PCR Real Time. La Chimica che utilizza sybr green, la taq man, la beacons mi sono chiare, mentre quella di annealing adiacente a parte il fatto che utilizza 2 sonde non ho capito come funziona. Potreste spiegarmela in parole povere? Grazie anticipatamente a tutti
In quel caso hai due sonde che si appaiano appunto in modo adiacente l'una rispetto all'altra sul templato; inoltre la prima sonda presenta ad un'estremità un reporter, mentre la seconda presenta un quencher all'estremità adiacente a quella della prima sonda. Così quando durante la fase di allungamento la polimerasi spiazza la prima sonda dal templato (grazie all'attività esonucleasica 5'-3') il reporter si allontana dal rispettivo quencher e può così emettere una fluorescenza ad una data lunghezza d'onda se eccitato, e venire così rilevato dallo strumento.