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hurricane86
Nuovo Arrivato

50 Messaggi

Inserito il - 24 febbraio 2009 : 21:14:44

in laboratorio stiamo procedendo a questo tipo di studio.
un putativo canale del potassio è stato identificato per BLAST sulla sequenza genomica di synechocystis. Di questo canale specifico non si sà nulla, e sembra avere solo poca omologia con qualsiasi altro organismo. Dalla letteratura si può quindi ricavare ben poco, per poterne studiare il ruolo da che parte si potrebbe iniziare?
i fattori su cui gioca o da cui è influenzato potrebbero essere tantissimi.
Potrei studiare per patch-clamp il ruolo nel mantenimento del potenziale.....
e se volessi studiare il suo ruolo nel mantenimento dell'osmolarità, con quale tecnica potrei procedere? devo per forza guardare le cellule al microscopio dopo aver cambiato la concentrazione salina nel mezzo di crescità?
grazie, spero di nn esseere troppo contorta!!

Think I'll lose my mind if I don't find something to pacify

....muore lentamente chi non esplora cio che non conosce....

chick80
Moderatore

Città: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 25 febbraio 2009 : 08:29:04

Sicuramente io inizierei con il patch clamp. In voltage clamp fai degli step di voltaggio e costruisci una curva I-V per le cellule wt e le cellule trasfettate con il canale. Poi vedi dove le due curve si intersecano (o prendi lo 0 della curva differenza) e se quello è veramente un canale per il potassio dovrebbe essere vicino al potenziale di equilibrio per il K+ (-77mV)

Per quanto riguarda il mantenimento dell'osmolarità il metodo più veloce direi che è confrontare innanzitutto le dimensioni/volume di cellule wt e trasfettate con il canale (magari con diverse quantità di canale trasfettato).

Dopodichè prendi tutte queste cellule e le metti in medium ipo/normo/iperosmolare (3 gruppi diversi di cellule) e ne confronti dimensioni/volume etc.

Se il canale è stato identificato in neuroni, può essere interessante valutare se è in grado di indurre un diverso pattern di firing delle cellule trasfettate. Alcuni canali K+ sono implicati in fenomeni di bursting, ad esempio.
Per testarlo fai delle iniezioni di corrente abbastanza lunghe in modo da avere più potenziali d'azione e ne puoi analizzare il pattern.

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