primers per RACE 3'

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cicciput
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21 Messaggi

Inserito il - 25 febbraio 2009 : 10:35:01

salve a tutti
vorrei chiedere 1 delucidazione sulla ricerca del primer forward complementare al cDNA per RACE 3'. Su che basi scelgo questo primer? O meglio, con quale altro primer reverse lo devo confrontare per paragonare le T di melting ed eventuali complementariet�? Al 5' del cDNA c'� la coda che ho aggoiunto al primer di oligo-dt...mi devo basare su quella sequenza? Se s�, non c'� conflitto tra le 2 Tm visto che quel primer reverse � substrato della RT (che lavora a 37�C c.a.) mentre il primer forward sar� substrato della Taq pol(che lavora a 73�C c.a.)?

grazie in anticipo!!!