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lucina
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5 Messaggi

Inserito il - 06 settembre 2010 : 15:10:46  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di lucina Invia a lucina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao ragazzi!!
Volevo chiedere dell info di estrazione...
Devo estrarre proteine da un tessuto epatico, fino ad adesso ho utilizzato una metodologia semplice:
congelo l'animale, estraggo l'epatopancreas e lo omogenizzo con un potter con una soluzione di Triton 1% e PSB.
Purtroppo non va bene, sono presenti delle schifezze che non vanno via!!
Qualcuno puo aiutarmi??
Ci sono pubblicazioni inerenti, io sto cercando, ma non č facile!!
Grazie

GFPina
Moderatore

GFPina

Cittā: Milano


8397 Messaggi

Inserito il - 06 settembre 2010 : 21:11:20  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Aspetta, ma innanzitutto di che animale stiamo parlando???

Io non ho mai sentito di congelamento di animali prima dell'estrazione degli ograni.

Di getto ti stavo rispondendo pensando a topi, ma visto che parli di "epatopancreas"... ovviamente non sono mammiferi!

Non saprei dirti cosa sono le schifezze che vedi, l'unica cosa che ho notato č che non sembra tu abbia utilizzato inibitori delle proteasi, forse ci vorrebbero.
Ma essendo io tutt'altro che esperta di animali che non siano mammiferi, ti consiglio di cercare in letteratura, ad es. forse questo puō esserti utile: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20580833

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lucina
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5 Messaggi

Inserito il - 27 settembre 2010 : 12:40:15  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di lucina Invia a lucina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao, grazie per il consiglio...conosco bene questa pubblicazione e altre simili.
Io lavoro con il Gambero rosso della Louisiana, sono degli esperimenti mai fatti quindi non trovo molto in letteratura.
Ho congelato l'animale per bloccare tutte le sue funzioni, e poi ho estratto l'epatopancreas, senza inibitori (purtroppo non li avevo ancora a disposizione), in ogni caso le mie analisi vengono deviate da dei pigmenti presenti nell'estratto. Sto cercando di separare i pigmenti dalle proteine, ma non č facile!
Qualcuno sā darmi qualche consiglio??
lucina
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