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PiccolaBimba
Nuovo Arrivato
17 Messaggi |
 Inserito il - 18 febbraio 2011 : 10:54:43
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Ciao a tutti vorrei sapere se qualcuno è in grado in base alla procedura riportartata (nell'articolo Lee, K., H. G. Lee, and Y. J. Choi. 2008. Proteomic analysis of the effect of bile salts on the intestinal and probiotic bacterium Lactobacillus reuteri.J. Biotechnol. 137:14–19) di dirmi se le proteine prese in analisi sono solo citosoliche o anche di membrana, solubili o totali? Grazie mille.
For this proteomic study, L. reuteri strain ATCC 23272was grown
on 200mL MRS broth (Difco Laboratories) in the absence of bile (control culture) or in the presence of 0.6 and 1.2 g/L bile (purified bile salts, Sigma). Logarithmically growing cellswere harvested at mid-exponential phase (OD600 nm =#8764;0.6) via centrifugation at 10,000×g for 10min at 4 #9702;C. The time necessary to reach the midexponential growth phase varied between 3 and 5 h depending on the bile concentration tested. The cells were then washed with 100mM Tris–HCl buffer, pH 7.5. The resulting cell pellets were resuspended in 1mL lysis buffer (62.5mMTris–HCl buffer, pH 6.8),and the cells were disrupted with an ultrasonic processor sonifier(Cole-Parmer, four cycles of sonification, 20 s each). Unbroken cells were removed by centrifugation (10,000×g for 10min at 4 #9702;C) and the protein content of the supernatant was measured using a BCA protein assay kit (Pierce) with bovine serum albumin as the standard.The isolated proteinswere stored at #8722;80 #9702;C, and resuspended
in a rehydration solution prior to electrophoresis.
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SpemannOrganizer
Utente
Città: Los Angeles
955 Messaggi |
Inserito il - 18 febbraio 2011 : 13:32:14
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| mah, non vedo l'uso di particolari detergenti, quindi direi che ricavano proteine citosoliche e associate alla membrana (non integrali per intenderci). |
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Martin.diagnostica
Utente Attivo
1582 Messaggi |
Inserito il - 18 febbraio 2011 : 13:36:00
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| non vedo neanche l'uso di inibitori delle proteasi quindi le proteine sono tutte belle che degradate mi sa che questo protocollo è stato scritto con i piedi <=> (piedeocollo) |
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SpemannOrganizer
Utente
Città: Los Angeles
955 Messaggi |
Inserito il - 18 febbraio 2011 : 14:58:23
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| o forse sono talmente bravi che estraggono proteine senza degradarne nemmeno una :) |
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