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RT-PCR buffer PCR trascrittasi inversa cDNA mRNA

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Discussione

Vertigo
Nuovo Arrivato

Prov.: Bari
Citt�: Noicattaro

5 Messaggi

Inserito il - 12 settembre 2014 : 10:57:42

Ciao ragazzi/e,
volevo solo un piccolo chiarimento in merito al protocollo della reverse transcriptase PCR: nel mix di reazione utilizzato per tale procedura, se dovessi eccedere con il buffer, cio� se dovessi metterci un volume doppio di buffer che cosa potrebbe succedere alla reazione? dovrei avere lo stesso la retrotrascrizione?
Un grazie anticipato a tutti

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 12 settembre 2014 : 12:59:57

Succeder� che tutti i reagenti saranno a met� concentrazione. A naso direi che probabilmente la reazione avverr�, ma sar� meno efficiente.

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Vertigo
Nuovo Arrivato

Prov.: Bari
Citt�: Noicattaro

5 Messaggi

Inserito il - 12 settembre 2014 : 18:46:43

Sulla perdita di efficienza mi trovi perfettamente d'accordo.
Il mio unico dubbio �: se raddoppio il solo volume di una delle componenti del mix di reazione, in questo caso il buffer (ma mantenendo i volumi di dNTPs, enzima, DTT etc secondo quanto indicato dal protocollo del kit)tutte le componenti sarebbero veramente dimezzate?
Grazie comunque per la tua risposta