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Tag   PCR    Primet test  Aggiungi Tag

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Lia79
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9 Messaggi

Inserito il - 09 dicembre 2014 : 14:35:46  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Lia79 Invia a Lia79 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao!!!

Ho disegnato diverse coppie di primers che a breve arriveranno (spero!!!). Al loro arrivo dovr testarli in modo da capire quali coppie amplificheranno e quali no. Come fare? PCR? Ci sono particolari accorgimenti cui prestare attenzione?

Help me, please!

midichloria
Nuovo Arrivato



75 Messaggi

Inserito il - 09 dicembre 2014 : 15:21:31  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di midichloria Invia a midichloria un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao! Devi usare i primers per amplificare una sequenza? Hai gi calcolato le temperature di melting dei vari primers? Sono temperature che non differiscono di pi di 5C? Hai controllato se i primers formano hairpins o hanno regioni che possono causarne l'appaiamento tra di loro?
Puoi controllare se i primers funzionano e qual' la temperatura ottimale di annealing dei primers con la tua sequenza facendo una PCR. La temperatura di annealing da utilizzare di solito corrispondente alla temperatura di melting meno 5C. Se per esempio hai due primers con Tm di 59C e 61C, usare una temperatura di annealing di 56C di solito da buoni risultati.
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Lia79
Nuovo Arrivato



9 Messaggi

Inserito il - 15 dicembre 2014 : 10:22:24  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Lia79 Invia a Lia79 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grazie!!!

Nella scelta dei primers ho semrpe cercato di evitare quelli che, da impostazioni teoriche del programma, potessero dare dimeri e Hairpins. Le temperature di melting, poi, poich i primers li ho progettati per poter lavorare in multiplex, sono tutte intorno ai 59C.
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