clonaggio blunt prodotto di PCR

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Autore

Discussione

Silvy
Nuovo Arrivato

Prov.: Bergamo
Citt�: Trescore Balneario

26 Messaggi

Inserito il - 17 marzo 2007 : 11:47:40

ciao a tutti!
sto facendo un clonaggio blunt di un prodotto di PCR amplificato con la Pfu e mi � sorto un dubbio: i prodotti di PCR hanno o no il 5'P? (infatti ho il dubbio che gli oligo sintetici non abbiano il 5'P). Nel caso non l'avessero, quindi, non posso defosforilare il vettore, altrimenti non riesco a ligare, giusto? Oppure dovrei defosforilare il vettore e trattare il frammento con una chinasi. Avete suggerimenti? Grazie per l'attenzione, buona giornata...

tommasomoro
Utente Junior

358 Messaggi

Inserito il - 18 marzo 2007 : 20:29:27

non li vendono gia' fosforilati
con ovvio sovraprezzo

ciao

t.

Cangrande
Utente Junior

Prov.: Verona

280 Messaggi

Inserito il - 20 marzo 2007 : 14:08:56

Forse e' sono io che non ci ho pensato... ma come mai pensi che siano privi del 5'P?

Magnifico atque victoriosissimo Domino, Domino Kani Grandi de la Scala.

Silvy
Nuovo Arrivato

Prov.: Bergamo
Citt�: Trescore Balneario

26 Messaggi

Inserito il - 20 marzo 2007 : 23:11:38

Gli oligo sono sintetizzati senza il fosfato al 5'...

tommasomoro
Utente Junior

358 Messaggi

Inserito il - 21 marzo 2007 : 13:17:48

http://www.dpci.unipd.it/DipPagesIt/Didattica/TBI/sintesi%20oligo.pdf

AleXo
Moderatore

Prov.: Estero
Citt�: San Francisco, California

1550 Messaggi

Inserito il - 21 marzo 2007 : 18:07:09

come dice Tommaso, basta ordinarli col 5'fosforilato, that's all!