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Sissy
Nuovo Arrivato
Prov.: Varese
12 Messaggi |
 Inserito il - 26 marzo 2007 : 12:31:32
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Dopo i relativi passaggi di estrazione,elettroforesi su gel di agarosio..a priva vista guardando il gel come si fa capire se è un gel di DNA oRNA? Riguarda forsela visualizzazione?ES.per il gel a DNA si utilizza per la visualizzazione delle bande sotto UV il bromuro di etidio(violetto)(per il gel a RNA mi sembra che si usi lo stesso ilBrEt).Questa domanda stupida l'hanno fatta all'esame di stato.
Sicuramente avendo svolto un tipo di tesi in genetica o biomol ne sapete piu' di me!!Accetto tutti i pareri possibili.Grazie! Buona giornata/buon lavoro
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Balsamo del Canadà
Nuovo Arrivato
Prov.: Verbano-Cusio-Ossola
Città: Verbania
97 Messaggi |
Inserito il - 27 marzo 2007 : 17:54:42
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Io provo a rispondere ma sono solo mie supposizioni quindi vi prego di correggermi! Io avrei risposto che prima di tutto una preparazione di DNA totale si dovrebbe presentare come uno smear continuo senza particolari bande evidenti oppure nel caso di DNA totale batterico come una singola banda molto grossa.
Per l'RNA invece direi che è si presente uno smear ma poco evidente e formato dagli mRNA a singola copia e poi almeno tre bande molto evidenti e distinte che rappresentano i tRNA e i due rRNA. Questo perchè questi ultimi sono presenti in elevatisso numero di copie.
I metodi di visualizzazione sono gli stessi quindi non attribuirei la differenza a questo.
Che ne dite?
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-B.del C.- |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 27 marzo 2007 : 19:03:52
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Ciao Sissy,
scusa non ho risposto prima perchè non mi era molto chiara la domanda... ma dopo la risposta di Balsamo del Canadà forse ho più chiaro cosa si intende.
Penso intendano "cosa vedi su gel se dopo estrazione semini il tuo campione (DNA o RNA) su gel così com'è?"
Allora se si tratta di RNA vedi un debole smear con 2 bande più evidenti: 28S e 18S, vedi figura:
se si tratta di DNA genomico vedi una banda molto grossa a elevato peso molecolare, vedi figura:
ovviamente se tagli con enzimi di restrizione la cosa cambia!
Le figure le ho prese da qui:
http://www.ambion.com/techlib/append/supp/rna_gel.html
http://www.carnegieinstitution.org/first_light_case/horn/DNA/dnagenomicgel.html
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Dionysos
Moderatore
Città: Heidelberg
1913 Messaggi |
Inserito il - 27 marzo 2007 : 20:21:27
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GFPina ne approfitto per farti una domandina veloce
riguardante la tua ultima immagine postata ,sperando
di non finire troppo off-topic..
Quella specie di scia molto corta che le bande di DNA
si lasciano IMMEDIATAMENTE alle spalle sta a significare
degradazione? precipitazione x colpa di sali? sporco?
Te lo chiedo perchè il mio ultimo gel è risultato IDENTICO
a quello nell'immagine (correvano infatti frammenti lineari
da 8-9 kb, proprio come quelli) e non mi saprei spiegare
quelli smear... tu come lo interpreteresti? |
Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)
Less Jim Morrison, more Sean Morrison!
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
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Dionysos
Moderatore
Città: Heidelberg
1913 Messaggi |
Inserito il - 28 marzo 2007 : 09:44:13
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In che senso? |
Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 28 marzo 2007 : 17:18:52
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Mah?? a parte il fatto che la figura non è mia e l'ho presa da internet,anch'io non chiarissimo il problema!
Se il DNA è degradato dovresti vedere uno smear sotto alla banda più che sopra!
Un "leggero" smear sopra alla banda capita anche a me, e può essere overload come dice chick.
Se invece ti riferisci al fatto che le bande hanno un pò la forma a U e non sono bande nette oltre alla quantità di DNA seminato possono anche essere le condizioni in cui è stato fatto migrare il gel (magari a voltaggio molto elevato!), ma non avendolo fatto io non saprei!
Però se guardi la figura intera vedi che anche le bande nei pozzeti in cui si ha il taglio con ER hanno quell'aspetto!
Spero di essere stata utile!
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Dionysos
Moderatore
Città: Heidelberg
1913 Messaggi |
Inserito il - 29 marzo 2007 : 11:48:47
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uhmmm
dopo un attento brainstorm sono arrivato alla conclusione che
deve (dovrebbe) trattarsi sia di overload che di voltaggio troppo elevato. Grazie a entrambi |
Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
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gel-Dna o gel RNA
Didattica
