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quyntu
Nuovo Arrivato

Città: cagliari


10 Messaggi

Inserito il - 14 marzo 2005 : 13:03:56  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di quyntu Invia a quyntu un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
SE HO UNA QUANTITA MOLTO PICCOLA DI DNA GENOMICO DA AMPLIFICARE DEVO AUMENTARE I CICLI ?
ESISTE IN COMMERCIO QUALCOSA CHE MI AMPLIFICA IL GENOMA? CIAO A TUTTI

Fil23
Utente Junior

gatto

Prov.: estero
Città: London


238 Messaggi

Inserito il - 15 marzo 2005 : 10:31:15  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Fil23  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Fil23 Invia a Fil23 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao!
Dipende da quanto tene serve e cose ne vuoi fare. Aumentando il numero dei cicli aumenta il numero di copie di DNA prodotto e quindi i grammi di DNA finale....però la PCR normale non è una tecnica quantitativa, quindi non sai mai la quantità esatta in grammi di DNA formato dopo un tot di cicli....l'unico modo è fare una PCR quantitativa, così controlli la quantità di DNA formato dopo ogni ciclo e fermi la PCR quando hai raggiunto la quantità desiderata....anche se in laboratorio finisci per usare sempre lo stesso protocollo e aggiustarlo sperimentalmente secondo i casi.
Il genoma in blocco unico non è amplificabile...almeno non con mezzi simil PCR. Se ti serve tanto genoma prendi tante cellule e fai l'estrazione del DNA....credo che sia l'unico modo...
spero di essetti stato utile
ciao ciao
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emitoso
Nuovo Arrivato




11 Messaggi

Inserito il - 22 marzo 2005 : 15:55:09  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di emitoso Invia a emitoso un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
il genoma in toto E' AMPLIFICABILE! vai un po' sul sito Amersham e troverai cio' che ti serve...poi ti consiglio una buona messa a punto elettronica (ci sono softwares molto forti in rete e gratuiti) e tecnica della tua PCR, prima di aumentare i cicli oltre i trenta. Ultimo consiglio, Taq Gold dell'Applied Biosystems a me ha risolto parecchi problemi.

Ciao!
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Fil23
Utente Junior

gatto

Prov.: estero
Città: London


238 Messaggi

Inserito il - 24 marzo 2005 : 11:46:21  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Fil23  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Fil23 Invia a Fil23 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Questa del genoma amplificabile non la sapevo....belli questi kit....un pò costosi....deve essere per questo che noi ste cose non si sono mai viste.....abbiamo 1 pcr per 1 intero laboratorio e la RT-pcr la prendiamo in prestito dal lab vicino....meravigliose sovvensioni statali! Ma pèer cosa si usa l'intera amplificazione del genoma....perchè per esempio in campo diagnostico\medico le grandi amplificazioni sono sconsigliate!
ciao ciao
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aurora
Nuovo Arrivato



5 Messaggi

Inserito il - 15 aprile 2005 : 19:15:01  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di aurora Invia a aurora un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao a tutti!
Mi potreste fornire un protocollo per l' allestimento di una coltura primaria di cellule tumorali?
Grazie!

Aury
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