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lisetta
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Prov.: Milano
Città: mialno
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 Inserito il - 16 ottobre 2007 : 08:57:10
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dove posso trovare i matrigel? intendo qualke nome di ditta ke lo venda...lo avete mai provato? funziona? grazie elisa
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
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Luca-DNA
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Prov.: Torino
Città: Torino
68 Messaggi |
Inserito il - 16 ottobre 2007 : 12:28:23
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BD Biosciences...
Provato e funziona...per mia esperienza diretta direi che i saggi di invasione con il matrigel vengono abbastanza bene...
Io generalmente utilizzo delle aliquote conservate a -20 (fatte dai nostri tecnici): le faccio scongelare a 4°C o in ghiaccio per tanto tempo (anche O/N). Risospendo poi la concentrazione di matrigel desiderata in medium e si fa il coating dei transwell. Lascio poi O/N i transwell sotto cappa per far sì che il matrigel si asciughi e la mattina seguente, prima di piastrare le cellule, reidrato il matrigel con medium (generalmente 50 ul).
Ciao
Luca |
A scientific man ought to have no wishes, no affections, - a mere heart of stone. (C. Darwin) |
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lisetta
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Prov.: Milano
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91 Messaggi |
Inserito il - 16 ottobre 2007 : 14:07:29
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| ciao tu fai così? io ho delle cellule epiteliali nasali dici ke possono funzionare? generalemnte uso 24 well (500ul) o six well(1 ml) però cn il collagen 6 nn funziona. Se uso 24 well o six well quanto metto? 500 ul o 1 ml giusto? inoltre a me hanno sempre detto di mettere ad 1 ml di collagene nella well in base alla sua dimensione lasciare tutta notte a 4 c o 3 h a 37 C poi togliere il collagene e rimetterlo nella sua eppendorf lavare cn pbs e lasciarlo fino all'arrivo delle cellule. poi togliere il pbs e mettere la quantità di terreno cn cellule. Mi sa ke fino adesso mi hanno detto sbagliato per quello il collagene nn funzionava vero? |
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Luca-DNA
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Prov.: Torino
Città: Torino
68 Messaggi |
Inserito il - 16 ottobre 2007 : 18:01:46
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Il protocollo che ti ho detto prima è per fare saggi di invasione su transwell, dove fai un coating dei cestelli con il matrigel in modo da verificare che le cellule piastrate invadano superando la "barriera" del matrigel.
Non ho mai usato il matrigel per fare il coating di well e quindi non saprei proprio che suggerirti... |
A scientific man ought to have no wishes, no affections, - a mere heart of stone. (C. Darwin) |
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lisetta
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Prov.: Milano
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Inserito il - 16 ottobre 2007 : 20:20:45
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| voi cm la fate una coating solution ad es con collagene su 24 well? |
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lisetta
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Prov.: Milano
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Inserito il - 18 ottobre 2007 : 10:24:08
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| ciao ragazzi qualcuno ha mai messo matrigel cm matrice per coating solution? ho una well da 24 cui si possono mettere max 500 ul. Devo fare 1:1000 di matrigel quanto ne metto? poi dopo la solidificazione mi hanno detto di lavare cn terreno...cioè poi il terreno lo lascio o lo aspiro e ne metto altro? grazie elisa |
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masi
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Inserito il - 18 ottobre 2007 : 13:50:56
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ciao, uso il Matrigel anche per fare saggi di adesione e distacco cellulari, lo uso per rivestire piastre da 96 w, alla concentrazione di 20ug/ml e ne dispenso 50ul/well, lascio o/n e la mattina dopo lo reidrato con 50ul di mezzo (ex DMEM) per 90' in agitazione a temperatura amb e prima di seminare le cellule lo rimuovo. Per le piastre da 24 secondo me basta una quantità di soluzione suff a ricoprire il fondo del pozzetto.
Spero di essere stata d'aiuto, buon rivestimento! |
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lisetta
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Prov.: Milano
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Inserito il - 19 ottobre 2007 : 10:19:55
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ciao scusa l'agitazione la fai x 90 secondi? dove? grazie |
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masi
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43 Messaggi |
Inserito il - 19 ottobre 2007 : 11:32:39
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90' sta per 90 minuti, in agitazione su un agitatore (quei "ripiani" che si muovono, non so come spiegartelo altrimenti, cmq non fraitendere agitazione con agitatore magnetico!)
se hai dubbi chiedi pure |
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lisetta
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Prov.: Milano
Città: mialno
91 Messaggi |
Inserito il - 19 ottobre 2007 : 13:19:28
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| ok grazie mille per la risp sei stata molto gentile. A me devono prestare una aliquota di matrigel e la piastro nelle 24 well ke contengono 500 ul. Ma tu lo rimuovi ma si è formato lo strato? per l'adesione intendo grazie elisa |
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masi
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43 Messaggi |
Inserito il - 19 ottobre 2007 : 14:16:19
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| Sì, il gel polimerizza e il necessario rimane aderente al fondo del pozzetto anche se togli il mezzo in cui lo reidrati!E' come per fibronectina e collageni vari! |
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lisetta
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Prov.: Milano
Città: mialno
91 Messaggi |
Inserito il - 19 ottobre 2007 : 14:44:44
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| sei stata gentilissima...però quando io ad es metto 300 ul di collagene 6 o 1 in pozzetto delle 24 well(ke al max contiene 500 ul) lo lascio over night a 4 c oppure 3 ore circa a 37 gradi. Poi lo tolgo lavo cn pbs(ke lascio nel caso nn ho subito lecellule) e poi tolto il pbs metto terreno contenente cellule. Però le cellule epiteliali nn aderiscono e nn riesco a capire...inoltre ho letto su un testo ke il collagene 1 tridimensionale lo mescolavano al terreno ke poi veniva messo nella well...cm posso fare tu hai un metodo per il collagene ke funzioni e aderiscano le cellule? perchè a me sinceramente nn sembrava aderisse la well sembrava sempre vuota...grazie |
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masi
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43 Messaggi |
Inserito il - 22 ottobre 2007 : 16:10:25
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Non ho mai rivestito piastre da 6, comunque quando rivesto i ppozzetti delle piastre da 96 con collagene IV uso una soluzione 20ug/ml in acqua e ne uso 50 ul/w e sia che le lascio polimerizzare 4 h o o/n le lascio a 37°C (mi hanno insegnato così quindi se non va bene ditemelo!! ). terminata la plomerizzazione prelevo il SN, lavo e semino le cellule. Non ho mai avuto problemi di adesione!
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lisetta
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Prov.: Milano
Città: mialno
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Inserito il - 22 ottobre 2007 : 16:22:22
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ma allora è sbagliato metterle a 4 c over night? grazie  |
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masi
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43 Messaggi |
Inserito il - 23 ottobre 2007 : 09:07:39
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Non lo so con certezza, a me hanno detto che si possono lasciare a 37°C anche o/n, l'ho fatto più volte e non ho mai avuto problemi.
Magari qualcuno sa risponderti con più precisione! |
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lisetta
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Prov.: Milano
Città: mialno
91 Messaggi |
Inserito il - 23 ottobre 2007 : 09:26:35
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| ok grazie mille a me hanno detto a 37 c per 3 4 ore e over night a 4 gradi poi lavo cn pbs e metto ancora pbs finchè nn metto terreno cn cellule. e li cn il pbs ha durata no limit. anke tu lavi con pbs? ciao grazie elisa |
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masi
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43 Messaggi |
Inserito il - 23 ottobre 2007 : 15:12:15
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Sì lavo anche io con PBS!
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valefo
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5 Messaggi |
Inserito il - 08 novembre 2007 : 17:43:39
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Citazione:
Messaggio inserito da masi
Sì lavo anche io con PBS!
Ciao...io lascio i filtri coperti da matrigel(200 microlitri) tutta la notte a 4°(o a 37°2-3h).dopo lavo il filto con terreno di coltura almeno 1h in incubatore.
DOMANDA: come conservate le camerine di boyden dopo averle smontate?
grazieeeeeeee |
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masi
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43 Messaggi |
Inserito il - 12 novembre 2007 : 12:35:10
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Cosa intendi per smontate?  |
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valefo
Nuovo Arrivato
5 Messaggi |
Inserito il - 15 novembre 2007 : 15:53:20
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| dopo l'invasione, tolgo i filtrini e poi lascio le camere di boyden in acqua distillata? o le lavate con qualcosa?grazie mille |
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Idriell
Nuovo Arrivato
Prov.: Bologna
Città: Bologna
83 Messaggi |
Inserito il - 13 luglio 2010 : 16:53:25
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ciao a tutti, scusate non sono molto sperita con il matrigel e non lo conosco. Devo semplicemente usarlo come supporto per delle colture cellulari ed è necessario diluirlo 1:3. Con cosa va diluito? con il medium di coltura ?
grazie |
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matrigel
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