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ggermano
Nuovo Arrivato




13 Messaggi

Inserito il - 06 dicembre 2007 : 14:49:51  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di ggermano Invia a ggermano un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao ragazzi
vorrei silenziare un gene di interesse ma provando a trasfettare con LipofectaminA 2000 oltre a non aver silenziato nulla, non ho avuto mortalità per le mie cellule tumorali (cosa molto strana). Ho utilizzato 5 micrl di lipofec per 75 pmol di siRNA ed ho fatto il tutto in piastre da 6 WELLS. Ovviamente neanche il mio controllo positivo si è spento. Qualcuno può suggerirmi qualcosA?

darkene
Utente Junior

occhi



291 Messaggi

Inserito il - 06 dicembre 2007 : 16:39:38  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di darkene Invia a darkene un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
non so. l'unica cosa che posso dirti è che io usavo l' iperfect seguendo il protocollo della casa.
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Luca-DNA
Nuovo Arrivato

Prov.: Torino
Città: Torino


68 Messaggi

Inserito il - 07 dicembre 2007 : 15:08:53  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Luca-DNA  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Luca-DNA Invia a Luca-DNA un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
I siRNA sono validi? Nel senso, sono già stati utilizzati precedentemente e si è visto lo spegnimento? Non sempre i siRNA fanno il loro lavoro...
Quando ho comprato gli shRNA commerciali per i miei geni in studio, solo 2-3 su 5 sono risultati buoni per ottenere uno spegnimento evidente.
Prova magari ad aumentare la quantità di siRNA in trasfezione...ed magari prova ad usare un controllo di trasfezione (es. GFP), giusto per escludere che la trasfezione sulle cellule non sia venuta bene...

A scientific man ought to have no wishes, no affections, - a mere heart of stone. (C. Darwin)
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