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caso1986
Nuovo Arrivato
Prov.: Bologna
Città: bologna
79 Messaggi |
 Inserito il - 25 gennaio 2008 : 10:59:43
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Premesso che son un minus habens della genetica, questa parte di esame come dicevo verte sui metodi di trasfezione per eucarioti...
ho alcune domande sull elettroporazione che non si son ben chiare perchè le slide son fatte a mano e son un pò a volte riduttive...
1)L'elettroporatore è un marchingegno tipo una scatola con uno spazio per una cuvetta(di 2 o 4 mm di diametro) che spara una scossetta a paramentro variabile(ho per fortuna il grafico di correlazione a diametro cuvetta, RT e T4 gradi)???
2)La forza della scossetta, cioè l unità di misura è VOLT/CENTIMETRI???
3)La durata della scossetta varia da 15-40 millisec a 4 gradi fin a 40-100 millisec a RT???
4)funziona solo coi protoplasti???
5)se si bisogna sempre prima di elettroporare creare protoplasti e poi metterli in sospensione con il dna che si vuole transfettare nella cellula???
6)i pori che si generano come permettono al dna di entrare???solo perchè ci son dei buchi o è l attrazione interna positiva con il dna negativo???
7)ho letto che si può usare in luogo dell agrobacterium sulle monocotiledoni(mais, frumento, riso ecc) ma come si fa???
si estraggono le cellule di pianta da un frammento di foglia o chi per lui e poi si fa tutta la procedura sulle cellule rendondelo protoplasti???
8)come si rendono protplasti le cellule?si lide la parete per via enimatica???che enzimi si usano???quanto tempo richiede...
GRAZIE DI CUORE PER L'ATTENZIONE
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caso1986
Nuovo Arrivato
Prov.: Bologna
Città: bologna
79 Messaggi |
 Inserito il - 25 gennaio 2008 : 12:25:47
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| qualunque risposta anche elementare va bene...:-) |
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Neuroscience
Utente
659 Messaggi |
Inserito il - 25 gennaio 2008 : 14:20:55
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1) l'elettroporatore è uno strumento piuttosto complicato, tipo elettroshock, che fa una cosa semplice, ovvero dà per un breve tempo una differenza di potenziale di X volt in una cella dove sono contenuti i batteri ed il DNA
2) ovviamente quello che importa di più è il passaggio di molecole cariche positive o negative. Dato che le cellette possono avere spessori diversi si può parlare di Volt/Centimetri come stimolo, ma x "Forza della scossetta" bisognerebbe analizzare anche altri parametri, da solo non dà molto senso.
3) non saprei, io la faccio a temperatura ambiente e la scarica dura da 0 a 4,5 millisec, dipende da quello che devi elettroporare, dal mezzo in cui è risospeso, dalla procedura di preparazione delle cellule e addirittura dal ceppo che vai ad elettroporare.
4) assolutamente no, si utilizza principalmente con i batteri, poi con le cellule eucariotiche e poi con quasi tutti gli organismi viventi, qualcuno anche su organismi pluricellulari. Per le piante però è il metodo più semplice, mentre per altri tipi di organismi è il metodo più raffinato.
5) non saprei, non l'ho mai fatto con i protoplasti
6) Tecnicamente non si sa molto, quello che è sicuro è che si formano dei "buchi" che buchi non sono in realtà, ma semplicemente dei "percorsi" ionici generati dalla scarica elettrica. In questo spostamento di cariche si sposta anche il DNA carico negativamente. In questo spostamento capita che il DNA possa essere spostato e poi fermato all'interno di un citosol e quindi dare l'effetto di una trasfezione o trasformazione. Di sicuro non ci può essere attrazione all'interno della cellula dato che è carico negativamente come il DNA che gli stai inserendo
7) non ho idea di che hai chiesto
8) una volta lo sapevo, giuro... ma l'ho anche dimenticato 
Buona parte delle cose a cui non ti ho risposto le trovi facilmente in un libro di biotecnologie agrarie oppure semplicemente su internet
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caso1986
Nuovo Arrivato
Prov.: Bologna
Città: bologna
79 Messaggi |
Inserito il - 25 gennaio 2008 : 16:40:08
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| grazie mille |
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