ragazzi per favore sapreste dirmi la differenza tra vettori per sostituzione e vettori per inserzione? poi ho un altro dubbio: come si fa ad identificare le famiglie geniche mediante pcr?? grazie in anticipo
un vettore di sostituzione possiede due sequenze omologhe al gene bersaglio fiancheggianti la sequenza di tuo interesse. una volta linearizzato, per ricombinazione omologa, la tua sequenza verrà sostituita a quella wt. quello di inserzione possiede una sola seq omologa. se linearizzi il vettore tagliando al centro di tale seq omologa, avrai una emisequenza al 5' e una al 3' della seq di interesse, cioè che vuoi inserire all'interno del tuo gene. la ricombinazione omologa in questo caso creerà un loop del vettore che verrà inserito nel gene. in alternativa puoi avere direttamente due seq alle estremità della tua seq inserto che però sono contigue nel gene bersagli, come mostrato in questa figura:
è un pò complicato spiegarlo così in due parole, ma se cerchi "ricombinazione omologa" su internet trovi un po' di cose. altrimenti chiedi pure se hai dubbi. ciao