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Ricciola
Nuovo Arrivato
38 Messaggi |
 Inserito il - 23 febbraio 2009 : 10:34:26
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ciao,
dopo aver risolto i miei problemi col western, ho bisogno di aumentare l'intensità delle bande perché non riesco a stabilire se c'è una variazione tra il controllo ed il patologico.
Come potrei fare?
Per il momento ho lasciato il Ab' tutto il week-end e poi pensavo di tenere ad impressionare la lastra 5 munuti anziché 1 come faccio di solito, voi avete altre idee?
thanks!
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mattia.dinunzio
Nuovo Arrivato
116 Messaggi |
Inserito il - 23 febbraio 2009 : 12:21:42
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secondo me se lasci troppo tempo in incubazione il primario o ne aumenti troppo la concentrazione rischi di sviluppare una nitro tutta nera perche il primario si è legato anche alle proteine del latte (almeno che tu non usi un AB MOLTO buono).
io caricherei piu proteine (se ne hai abbastanza naturalmente), aumenterei di poco la concentrazione (tipo il doppio) del primario e aumenterei il tempo di esposizione. al limite puoi usare anche un ECL molto piu sensibile. la PIERCE ne ha alcuni che richiedono per proteine abbastanza espresse tempi di esposizione di 1 secondo.
spero di esserti stato utile
ciao |
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Ricciola
Nuovo Arrivato
38 Messaggi |
Inserito il - 23 febbraio 2009 : 15:54:12
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grazie  |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 23 febbraio 2009 : 20:00:56
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Concordo con mattia, esistono varie ditte che producono kit per la rivelazione, lo stesso ECL esiste in versione PLUS che serve apposta per aumentare l'intensità del segnale. Io ne uso uno della Roche, ma in ogni caso ce ne sono molti.
Aumentare il tempo di esposizione sicuramente aiuta, ogni volta che si prova un nuovo anticorpo bisognerebbe verificare il tempo di esposizione per avere il risultato ottimale.
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Eleo
Nuovo Arrivato
Prov.: Pavia
89 Messaggi |
Inserito il - 10 marzo 2009 : 11:14:29
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aumentare la quantità di proteine da caricare
aumentare la concentrazione del primario
usarlo O/N al massimo o poco più altrimenti hai troppo aspecifico
cambiare substrato di sviluppo
aumentare il tempo di esposizione (in genere per prove faccio 30 secondi-1 minuto-5 minuti-10 minuti-30 minuti-1 ora e in casi disperati la lascio random per tempi lunghi tipo 3-4-5-ore e poi vado a vedere) (in genere se non c'è segnale dopo 10 minuti è difficile avere una buona lastra utilizzabile con maggiori esposizioni, ma a volte si può avere un indicazione di qual'è il problema, e a volte qualcosa esce). |
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Western: aumentare intensità
Didattica e Relazioni
