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Ilien
Nuovo Arrivato
Città: Catania
4 Messaggi |
 Inserito il - 15 aprile 2009 : 15:03:12
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Ciao a tutti!
Volevo chiedervi un parere sulla preparazione del colorante Blubromofenolo, necessario per la colorazione del DNA durante la corsa elettroforetica.
le concentrazioni necessarie per la sua preparazione sono:
0.25% di blubromofenolo
15% di Ficoll
sciolti in TBE 1x
Quindi per la preparazione del colorante il cui Vf è 50 ml devo prendere:
0.125 gr di blubromofenolo
7,5 gr di Ficoll
e sciogliere il tutto in 50 ml di TBE?
Sarà che oggi non ci sono tanto con la testa, ma questi conti non mi convincono..e a voi?
Grazie a chi avrà la pazienza di rispondermi e di suggerirmi se c'è un metodo chiaro per non confondermi 
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Bisogna rimanere in perfetto silenzio per vedere bene le cose.. |
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Schuldiner86
Utente Junior
Prov.: Viterbo
Città: Bologna
581 Messaggi |
Inserito il - 15 aprile 2009 : 16:05:11
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Come prima cosa il blu di bromofenolo non serve a colorare il DNA ma semplicemente a seguire un fronte elettroforetico. Per visualizzare il DNA sotto gli UV di usa il Bromuro di etidio. Comunque innanzitutto devi sapere quant'è la tua stock di TBE. Se ipotizzando fosse 10X significa che in 50ml dovresti mettere 50ml/10X=5ml di TBE 10X per avere una concentrazione di 1X e portare a volume con H20 distillata. Per gli altri:
0,25% di blu di bromofenolo significa 0,25g in 100ml => 0,125g in 50ml (basta dividere per 2)...Quindi OK, così anche per il Ficoll. Nel caso non fosse stato così semplice avresti potuto usare la proporzione:
0,25g : 100ml = x g : Vf (ml)
Tutto sta quindi sapere quale è la concentrazione di partenza del tuo TBE. Io comunque prima metterei TBE, scioglierei tutto se ci riesci e poi porterei a volume. |
 
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Ilien
Nuovo Arrivato
Città: Catania
4 Messaggi |
Inserito il - 16 aprile 2009 : 12:11:35
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Si, scusa..ho scritto di fretta e il significato di "colorare il DNA" era proprio inteso in termini di vedere il fronte della corsa sul gel..
E, inoltre, si, il mio TBE è già 1X, quindi, come dici tu, basta dividere il tutto per due..volevo appunto avere la conferma =)
Grazie per il tuo intervento |
Bisogna rimanere in perfetto silenzio per vedere bene le cose.. |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
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