Kit StarGate® for fast protein expression cloning

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adamonobile
Nuovo Arrivato

4 Messaggi

Inserito il - 08 settembre 2014 : 14:59:20

Salve a tutti,
sto utilizzando per la prima volta un kit di vettori plasmidici di clonaggio ed espressione StarGate® acquistato presso IBA. Probabilmente il mio problema risulterà banale :)
Andando a leggere il manuale vi sono 2 capitoli che riguardano ogni reazione, uno che tratta i vari reagenti e come conservarli e uno sul protocollo vero e proprio di utilizzo.
Il mio problema riguarda due componenti che sono:
1) 400 bp PCR-fragment (2 nM)
2) Donor Vector with 400 bp DNA insert (2 ng/#956;l)

Questi due vanno sotto il nome di "Control reaction" ma non riesco a capire come utilizzarli e a cosa possano servire dato che non c'è un capitolo che li tratti dal punto di vista dei protocolli. Qualcuno può aiutarmi?

Grazie a tutti anticipatamente!

GFPina
Moderatore

Città: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 08 settembre 2014 : 16:25:29

Il primo è un amplificato, lo utilizzi come fai per la sequenza che hai amplificato tu, quindi in parallelo avrai:
- la tua sequenza amplificata da inserire nel vettore
- l'amplificato fornito da inserire nel vettore

Il secondo è il plasmide che contiene già l'inserto dell'amplificato, quindi lo userai nella fase successiva assieme al plasmide in cui hai inserito il tuo inserto e quello in cui hai inserito l'amplificato di controllo (vedi step precedente)

adamonobile
Nuovo Arrivato

4 Messaggi

Inserito il - 08 settembre 2014 : 17:35:20

Grazie mille per l'aiuto e la velocità di risposta! Un ultima domanda :)
Io avrei controllato il mio destination vector tramite digestione con gli enzimi di restrizione e in seguito elettroforesi.
Questo controllo all'atto pratico a cosa mi servirebbe?