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Inserito il - 25 settembre 2008 : 14:35:27
...dovrei fare un saggio western per la ricerca non delle proteine presenti in un lisato ma per la ricerca degli Ab anti proteina presenti in dei sieri da utilizzare come Ab primario!!!mi chiederete perchè non faccio l'ELISA?beh l'ELISA l'ho già fatta ma il mio prof vuole una conferma in Western!!!
le mie domande sono le seguenti(visto che non ho molta praticità con il western!):
ciao... vediamo se ho capito bene... io faccio western in continuazione e utilizzo sempre lo stock di sample buffer 5x che poi diluisco nel campione a 1X... come quantità di materiale da caricare considera che per far sì che un western sia positivo si devono caricare almeno 30-40 microgrammi di materiale, quindi puoi risalirci a partire dalla concentrazione che ti ha dato l'ELISA. Infine come secondario devi utilizzare un HRP-coniugato, altrimenti non si legherà si reagenti che devi utilizzare per sviluppare la lastra... spero di esserti stata utile 
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