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Tag   PCR    Primet test  Aggiungi Tag

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Lia79
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9 Messaggi

Inserito il - 09 dicembre 2014 : 14:35:46  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Lia79 Invia a Lia79 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao!!!

Ho disegnato diverse coppie di primers che a breve arriveranno (spero!!!). Al loro arrivo dovr˛ testarli in modo da capire quali coppie amplificheranno e quali no. Come fare? PCR? Ci sono particolari accorgimenti cui prestare attenzione?

Help me, please!

midichloria
Nuovo Arrivato



75 Messaggi

Inserito il - 09 dicembre 2014 : 15:21:31  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di midichloria Invia a midichloria un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao! Devi usare i primers per amplificare una sequenza? Hai giß calcolato le temperature di melting dei vari primers? Sono temperature che non differiscono di pi˙ di 5║C? Hai controllato se i primers formano hairpins o hanno regioni che possono causarne l'appaiamento tra di loro?
Puoi controllare se i primers funzionano e qual'Ú la temperatura ottimale di annealing dei primers con la tua sequenza facendo una PCR. La temperatura di annealing da utilizzare di solito Ú corrispondente alla temperatura di melting meno 5║C. Se per esempio hai due primers con Tm di 59║C e 61║C, usare una temperatura di annealing di 56║C di solito da buoni risultati.
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Lia79
Nuovo Arrivato



9 Messaggi

Inserito il - 15 dicembre 2014 : 10:22:24  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Lia79 Invia a Lia79 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grazie!!!

Nella scelta dei primers ho semrpe cercato di evitare quelli che, da impostazioni teoriche del programma, potessero dare dimeri e Hairpins. Le temperature di melting, poi, poichŔ i primers li ho progettati per poter lavorare in multiplex, sono tutte intorno ai 59░C.
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