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 Biologia Molecolare
 disegnare primers per 2 isoforme da 4 esoni real time rt pcr
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kiky986
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2 Messaggi

Inserito il - 15 ottobre 2015 : 20:28:31  Mostra Profilo Invia a kiky986 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
se un gene è composto da 4 esoni (1, 2, 3, 4) ed ha 2 isoforme: isoforma 1 (esoni 1, 2, 3) ed isoforma 2 (1, 2, 4). Dove si devono disegnare i primer per real time RT PCR per analizzare i livelli di espressione dell'isoforma 2?
come faccio a capirlo? mi spiegate bene il ragionamento?

Geeko
Utente

Ctenophor1.0

Città: Milano


1042 Messaggi

Inserito il - 15 ottobre 2015 : 22:44:10  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Geeko Invia a Geeko un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Bhe dato che parli di "espressione" dell'isoforma 2 e vuoi valutarla mediante RT-PCR (cioè Retrotranscription PCR) significa che avrai bisogno di estrarre gli mRNA dal tuo campione, sottoporli a retrotrascrizione in vitro e otterrai così il tuo cDNA. A questo punto sottoponi il cDNA a PCR usando i primer che devi disegnare! Ora, se vuoi valutare non l'espressione del tuo gene in generale, bensì della sua specifica isoforma 2, dovrai usare una coppia di primers specifica per quella isoforma. Domanda seguente, in cosa si differenzia l'isoforma 2 dalla 1? Bhe lo hai scritto tu, quindi ora hai qualche elemento in più per rispondere no?


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kiky986
Nuovo Arrivato



2 Messaggi

Inserito il - 15 ottobre 2015 : 23:07:04  Mostra Profilo Invia a kiky986 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
quindi tra le seguenti risposte tu come risponderesti?
- forward sull'esone 1 e reverse sul 4
- forward sul 3 e reverse sul 4
- forward sul e e reverse sul 3
- forward sul 2 e reverse sul 4
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Geeko
Utente

Ctenophor1.0

Città: Milano


1042 Messaggi

Inserito il - 16 ottobre 2015 : 18:45:27  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Geeko Invia a Geeko un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ahahah mi rifai la domanda? Perché non provi a dare tu una risposta intanto e poi ti do il mio parere?


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