Forum

Nome Utente:
Password:
Riconoscimi automaticamente
 Tutti i Forum
 Laboratorio
 Biologia Molecolare
 Amplificato di un amplificato
 Nuova Discussione  Nuovo Sondaggio Nuovo Sondaggio
 Rispondi Aggiungi ai Preferiti Aggiungi ai Preferiti
Cerca nelle discussioni
I seguenti utenti stanno leggendo questo Forum Qui c'è:

Tag   amplificato    controllo positivo  Aggiungi Tag

Quanto è utile/interessante questa discussione:

Autore Discussione  

adrenerg1co
Nuovo Arrivato



11 Messaggi

Inserito il - 20 settembre 2018 : 11:45:58  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di adrenerg1co Invia a adrenerg1co un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Buongiorno ragazzi

Ho un controllo positivo, ovvero un batterio già sequenziato ed usato poi come controllo,che sta finendo, perciò la mia domanda è posso amplificare un amplificato ... dura nel tempo ... lo devo purificare perché duri?

grazie

domi84
Moderatore

Smile3D

Città: Glasgow


1714 Messaggi

Inserito il - 20 settembre 2018 : 12:36:43  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di domi84 Invia a domi84 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Non siamo nella vostra testa, se volete aiuto dovete dare info comprensibili...

Citazione:

controllo positivo, ovvero un batterio già sequenziato ed usato poi come controllo


Un controllo de che? Crescita batterica? Genoma batterico? Produzione plasmidica? Produzione proteica? Tossine?

Citazione:

posso amplificare un amplificato


Si...ma di cosa???

Citazione:

lo devo purificare


Ma cheeee? E da coooosaaa??

Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato...
Torna all'inizio della Pagina

adrenerg1co
Nuovo Arrivato



11 Messaggi

Inserito il - 21 settembre 2018 : 11:47:01  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di adrenerg1co Invia a adrenerg1co un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
in passato ho identificato una colonia batterica tramite sequenziamento; di questa colonia ho fatto una scorta, un agarino congelato.
esaminando successivamente colonie che mi parevano simili in pcr classica ho usato come controllo positivo il batterio presente nell'agarino identificato; per questo ora lo definisco controllo positivo.

ora ipotizziamo che tale scorta sia finita e che l'unico traccia del controllo positivo rimasto sia l'amplificato che ho preparato da far correre nel gel.

da qui arrivo alla domanda. l'amplificato del controllo positivo che non ho usato nel gel posso conservarlo in qualche modo per usarlo come controllo positivo in futuri gel? come lo conservo dato che gli amplificati durano poco? posso in qualche modo riamplificarlo per aumentarne le scorte?
Torna all'inizio della Pagina

domi84
Moderatore

Smile3D

Città: Glasgow


1714 Messaggi

Inserito il - 22 settembre 2018 : 10:16:22  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di domi84 Invia a domi84 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Sei hai ancora il contenitore dell' "agarino congelato" (eppendorf, falcon, piastra) anche vuoto, puoi passarci l'ansa di platino e striccarlo su una piastra per ricrescere il batterio ... aggiungerci un poco poco di mezzo e farlo ripartire (di solito rimangono sempre tracce di batteri nel contenitore vuoto sufficienti a ricrescerlo).

Citazione:

l'amplificato del controllo positivo che non ho usato nel gel posso conservarlo in qualche modo per usarlo come controllo positivo in futuri gel? come lo conservo dato che gli amplificati durano poco?


Di solito il DNA è stabile, lo metterei semplicemente a -20

Citazione:

come lo conservo dato che gli amplificati durano poco? posso in qualche modo riamplificarlo per aumentarne le scorte?


Puoi usarlo come stampo per PCR successive usando gli stessi primer, in modo da amplificarlo. Ti consiglio vivamente di sequenziare l'amplificato di tanto in tanto perchè la PCR tende ad introdurre degli errori e col passare del tempo potresti ritrovarti qualcosa di diverso da quello originale

Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato...
Torna all'inizio della Pagina
  Discussione  

Quanto è utile/interessante questa discussione:

 Nuova Discussione  Nuovo Sondaggio Nuovo Sondaggio
 Rispondi Aggiungi ai Preferiti Aggiungi ai Preferiti
Cerca nelle discussioni
Vai a:
MolecularLab.it © 2003-18 MolecularLab.it Torna all'inizio della Pagina