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Autore

Discussione

kiki
Nuovo Arrivato

97 Messaggi

Inserito il - 12 dicembre 2007 : 09:08:08

Ciao a tutti!ho bisogno di un chiarimento: alla fine della dhplc ottengo un cromatogramma con una serie di picchi in cui posso vedere se i miei campioni sono omozigoti o eterozigoti, ma in base a cosa si formano picchi diversi?so che con la dhplc riesco a distinguere omo ed eteroduplex perch� sono trattenuti diversamente in colonna e precisamente l'eteroduplex a causa del mismatch viene trattenuto meno. Alla macchina x la dhplc so che � collegato uno spettrofotometro che legge ad una lunghezza d'onda di 260 nm, quindi semplicemente rileva la presenza della molecola di dna..ma come fa lo spettrofotometro a leggere la differenza tra omo ed eteroduplex dando poi picchi diversi?Quello che non mi � chiaro � come fa lo strumento a leggere la differenza?

Grazie mille!!!

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 12 dicembre 2007 : 11:06:25

La DHPLC � una cromatografia. Gli omo e gli eteroduplex hanno tempi di ritenzione diversi, se non ricordo male gli omoduplex escono dopo gli eteroduplex.

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cin
Utente Junior

Prov.: Padova
Citt�: Padova

558 Messaggi

Inserito il - 12 dicembre 2007 : 12:15:12

Prima di immettere il tuo DNA nel DHPLC tu tratti il campione con degli enzimi di restrizione, in base a come � avvenuto il taglio otterrai dei picchi divrsi.

Talia
Nuovo Arrivato

Prov.: Napoli
Citt�: Napoli

35 Messaggi

Inserito il - 18 febbraio 2008 : 19:26:41

SALVE!Vorrei un chiarimento in merito a questo argomento.
Dalla dHPLC dovrei ottenere un cromatogramma con 4 picchi,ma in realt� ne ottengo solo 2!
Questi 4 ipotetici picchi,a cosa corrispondono?
Grazie

Talietta

darkene
Utente Junior

291 Messaggi

Inserito il - 18 febbraio 2008 : 20:22:00

i quattro picchi ipotetici sono:
omoduplex wt
omoduplex mutato
eteroduplex wt
eteroduplex mutato

Francy1987
Nuovo Arrivato

Prov.: RM
Citt�: Roma

4 Messaggi

Inserito il - 28 settembre 2011 : 10:11:01

ma come � possibile che si formi un eteroduplex wt? di norma il controllo � wt e se il mio campione � wt, non dovrei avere un omoduplex wt? e poi � possibile distinguere una mutazione in eterozigosi da una in omozigosi e se s� come?

Grazie!!!