- Il mezzo di crescita utilizzato è così costituito (per un volume finale di 500 ml):

° DMEM (440 ml)
° FBS 10X (50 ml)
° Penicillina/Streptamicina (5 ml)
° Glutammina (5 ml)

- Le cellule vengono scongelate, trasferite in provette da 15 ml contenenti 10 ml di terreno di coltura, centrifugate e lavate per diluire e allontanare il DMSO, crioprotettore utilizzato per il loro congelamento, ma tossico a temperatura ambiente.

- Dopo la centrifugazione il pellet cellulare viene risospeso in terreno di crescita e le cellule vengono piastrate.

- Quando le cellule sono prossime alla confluenza esse vengono splittate.

- Si elimina il terreno dalla piastra e si aggiungono 10 ml di una soluzione di PBS-EDTA che, dopo incubazione a 37°C per 10 minuti, favorisce il distacco delle cellule dalla piastra.

- Le cellule staccate vengono poste in una provetta da 15 ml e centrifugate.

- Il pellet viene quindi risospeso in 10 ml di terreno e suddiviso in quattro nuove piastre Petri, alle quali verranno poi aggiunti 7,5 ml di mezzo per raggiungere un volume finale di 10 ml.