Mutagenesi sito specifica

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Autore

Discussione

FrancescaC
Nuovo Arrivato

10 Messaggi

Inserito il - 13 febbraio 2009 : 16:26:24

Ciao a tutti!!!

C'� qualcuno che mi saprebbe dire in cosa consiste la mutagenesi sito-specifica con oligonucleotidi mutati

?
Grazie mille!!!

I rock. That's all

mikroula
Nuovo Arrivato

11 Messaggi

Inserito il - 13 febbraio 2009 : 17:30:11

Non ne so molto ma qui sul sito ho trovato queste due relazioni che potrebbero esserti utili.
http://www.molecularlab.it/post-genomica/proteomica/mutagenesi-sito_diretta.asp
http://www.molecularlab.it/post-genomica/proteomica/mutagenesi-random.asp

Lisa.ody
Nuovo Arrivato

43 Messaggi

Inserito il - 14 febbraio 2009 : 10:29:16

allora...si parte da un frammento di Dna a singolo filamento che vogliamo mutare. si inserisce questo frammento all'interno di un vettore M13. dopo ci� si utilizza un oligonucleotide complementare al frammento da mutare tranne che in un punto, corrispondente a una base.
a questo punto tramite una Dna polimerasi si sintetizza , partendo dall'oligo mutato che funge da innesco, il filamento complementare dell'intero vettore.
otterrai dunque un filamento wt e uno mutato.
questo nuovo vettore va utilizzato per la trasfezione di un sistema cellulare. verranno replicati filamenti wt e mutati. ci aspettiamo una resa del 50:50 ma non � cos� perch� il sistema cellulare che utilizziamo � di E.coli e questi mettono in atto un "meccanismo di riparazione" del Dna quando c'� una mutazione per cui alla fine otteniamo che l'efficienza di mutazione � molto bassa ovvero intorno al 10-20%.
per avere una maggiore efficienza di solito si utilizzano due strategia:
selezione del filamento mutato tramite una marcatura utilizzando il gruppo fosfotioato.
selezione con il metodo di Kunkel.

se ti serve la spiegazione di queste due strategie chiedi pure.

Allegato:

mutagenesi sito -specifica.doc
723,91 KB

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 14 febbraio 2009 : 10:43:17

http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=1168

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