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tkiara
Nuovo Arrivato



30 Messaggi

Inserito il - 12 ottobre 2009 : 12:07:23  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di tkiara Invia a tkiara un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao, ho una domanda: un promotore di una sequenza che codifica per una proteina con localizzazione nucleare, può essere fuso con un'altra sequenza che invece codifica per una proteina che spontaneamente NON va nel nucleo e quindi conferirgli un profilo di espressione nucleare?
grazie

Dionysos
Moderatore

D

Città: Heidelberg


1913 Messaggi

Inserito il - 12 ottobre 2009 : 13:56:06  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Dionysos  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Dionysos Invia a Dionysos un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Se ho capito bene la domanda, io direi di no. No, perchè la localizzazione nucleare
non è decisa a livello del promotore, ma è gestita a livello post-traduzionale dalla
NLS (nuclear leading sequence). E' aggiungendo tale sequenza ad una qualsiasi proteina,
nucleare o non nucleare, che dovresti ottenerne - ottimisticamente - la traslocazione nel nucleo.

Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)

Less Jim Morrison, more Sean Morrison!


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tkiara
Nuovo Arrivato



30 Messaggi

Inserito il - 12 ottobre 2009 : 16:13:35  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di tkiara Invia a tkiara un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Sono daccordo , ma allora cosa devo fare per vedere la B-galattosidasi (che NON ha NLS)localizzata nel nucleo?
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Dionysos
Moderatore

D

Città: Heidelberg


1913 Messaggi

Inserito il - 12 ottobre 2009 : 16:24:48  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Dionysos  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Dionysos Invia a Dionysos un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Clonare la beta-galattosidasi in un vettore che porta
la NLS nella regione C-terminale, seguita da un codone
di stop e, più a valle, da un segnale di poliadenilazione


Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)

Less Jim Morrison, more Sean Morrison!


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GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8398 Messaggi

Inserito il - 12 ottobre 2009 : 17:21:20  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Potresti per cortesia scrivere la stessa domanda in un solo messaggio?
Ti è già stato detto una volta!
In questo modo generi solo confusione ed è contrario al regolamento del forum:
Citazione:
Regolamento
9) Non duplicare i messaggi, nè all'interno dello stesso forum, nè scrivendo lo stesso messaggio su più forum (cross-posting), perchè ciò rende molto difficile seguire una conversazione se piu persone rispondono allo stesso messaggio in diversi forum.
Se si è indecisi in quale sezione scrivere la propria domanda sceglierne una che sembri appropriata, i moderatori provvederanno a spostarla in caso lo ritengano necessario.
Tutti i messaggi doppi verranno cancellati.

Se non è chiaro qualcosa o vuoi ulteriori chiarificazioni continua nello stesso messaggio, grazie.

Per ora tengo aperto questo e chiudo il precedente.
http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=15122
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biologomolecolare84
Nuovo Arrivato

DNA

Prov.: Rm
Città: Roma


69 Messaggi

Inserito il - 01 novembre 2010 : 11:50:46  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di biologomolecolare84 Invia a biologomolecolare84 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao.
Scusate se mi intrometto in questa discussione ma ho una domanda che riguarda l'enhancer trap e ho evitato di scrivere un nuovo post.
Non avendo mai visto questa tecnica praticamente, mi è venuto un dubbio che sta a monte di tutto il lavoro.
Quando facciamo l'enhancer trap vogliamo, sostanzialmente identificare una regione regolatrice di un dato gene (dato che poi viene amplificata mediante plasmide rescue).
La mia domanda è: Sappiamo già a priori dove l'elemento P modificato si inserisce? Ciò o decidiamo noi il gene da studiare, se si come?
Oppure l'inserzione avviene casualmente e noi ci focalizziamo solo sulle sequenze regolatrici per poi procedere all'identificazione genica?
Questa ultima considerazione mi sembra più plausibile ma vorrei esserne sicuro al 100%.
Grazie a tutti per la risposta
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bibi86
Nuovo Arrivato



15 Messaggi

Inserito il - 06 novembre 2010 : 01:56:14  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di bibi86 Invia a bibi86 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao!
In realtà l'enhancer trap è utilizzata per individuare in modo generico la presenza di un enhancer. In altre parole questa tecnica NON è usata per sapere se un enhancer regola un determinato gene, ma solo per cercare in modo random dove sono gli enhancer. Del resto l'inserzione del costrutto utilizzato che contiene promotore e reporter, è casuale per cui non è assolutamente possibile usare questa tecnica per attribuire un enhancer a un gene. Per attribuire la funzione regolativa di un enhancer su un gene esistono altre tecniche.
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