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coliCOLIBRI
Nuovo Arrivato



14 Messaggi

Inserito il - 08 novembre 2010 : 22:02:19  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di coliCOLIBRI Invia a coliCOLIBRI un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao ragazzi ho un problemino tecnico e spero qualcuno possa aiutarmi...vi spiego il mio dubbio:

devo fare una diluizione 1:5 della sostanza X in acqua ed ottenere un volume finale= 5 ml... ho un piccolo dubbio e un vostro aiuto mi rassicurerebbe molto!!!

Grazie in anticipo

Patrizio
Moderatore

mago

Città: Vancouver


1900 Messaggi

Inserito il - 08 novembre 2010 : 22:33:31  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Patrizio  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Patrizio Invia a Patrizio un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
http://www.molecularlab.it/principi/calcoli-laboratorio/diluizioni.asp


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coliCOLIBRI
Nuovo Arrivato



14 Messaggi

Inserito il - 08 novembre 2010 : 22:44:59  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di coliCOLIBRI Invia a coliCOLIBRI un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Patrizio grazie del link...ancora non conosco bene il sito...sono nuova!!!
approfitto per richiedertelo...mi diresti numericamente il risultato del mio quesito...voglio capire se ho capito!!!
(permettimi il gioco di parole)
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 09 novembre 2010 : 07:32:35  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
x:y vuol dire x parti in y parti finali. Quindi 1:5 vuol dire 1 parte in 5 parti finali. La "parte" può essere il ml il ul il l o quello che vuoi tu, non importa.

E' come per fare i cocktail, stesso ragionamento... uno screwdriver è una diluizione 1:3 di vodka in succo d'arancia

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Daria85
Utente

aplisia



678 Messaggi

Inserito il - 09 novembre 2010 : 12:03:15  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Daria85 Invia a Daria85 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
se scrivi 1:5 significa "1 a 5"...mi sembra mooolto semplice no?
se hai un V fin di 5ml...5\5 = 1ml + 4ml

ciao
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coliCOLIBRI
Nuovo Arrivato



14 Messaggi

Inserito il - 09 novembre 2010 : 17:30:53  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di coliCOLIBRI Invia a coliCOLIBRI un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
grazie mille e chick80 grazie per la dritta "alcolica"
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kiki_ale
Nuovo Arrivato



4 Messaggi

Inserito il - 13 novembre 2010 : 22:09:30  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di kiki_ale Invia a kiki_ale un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Salve ragazzi, ho un dubbio sulla preparazione di uno stock di 4 nucleotidi per uso pcr, la cui concentrazione finale e totale deve essere 10mM, partendo da singoli nucleotidi 100mM, ci sono pareri contrastanti in laboratorio. Io ho ragionato così: se metto 10microlitri di ogni dNTP (100mM) in una provetta, allora ognuno sarà concentrato 1/4 quindi 25mM. Poichè nella soluzione finale ognuno deve essere 2.5mM (x avere 10mM totali) allora il fattore di diluizione (25/2,5= 50) deve essere 50,
aggiungo ai quattro nucleotidi(40microlitri) 460microlitri di acqua......(Vfinale 500microlitri)...
E' esatto??

Grazie grazie
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Patrizio
Moderatore

mago

Città: Vancouver


1900 Messaggi

Inserito il - 14 novembre 2010 : 10:43:53  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Patrizio  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Patrizio Invia a Patrizio un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
considera ogni dNTP come un nucleotide che nel volume finale deve avere concentrazione 10mM, alla fine porti a volume


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kiki_ale
Nuovo Arrivato



4 Messaggi

Inserito il - 14 novembre 2010 : 13:11:07  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di kiki_ale Invia a kiki_ale un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
questo vuol dire che le mie ipotesi sono sbagliate!! Ossia non è vero che se devo avere una soluzione 10mM dei dNTP, ognuno in quella soluzione è cncentrato 2,5mM?????
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Patrizio
Moderatore

mago

Città: Vancouver


1900 Messaggi

Inserito il - 14 novembre 2010 : 13:29:36  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Patrizio  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Patrizio Invia a Patrizio un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
metti 2.5 mM di ognuno , mi sono espresso male


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GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8398 Messaggi

Inserito il - 14 novembre 2010 : 19:15:57  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Se la devi preparare 10mM "totale" allora è giusto considerare 2,5M ogni nucleotide, però il conto che hai fatto è sbagliato!
Se prendi 10ul di un nucleotide e lo metti in 500ul totali alla fine la concentrazione del singolo nucleotide sarà 2mM non 2,5mM.
100mM x 10ul  = 2mM
    500ul


Però sei sicurissimo di dover preparare una soluzione 10mM totale? Mi sembra molto strano perchè in genere per la PCR si utilizzano mix di dNTPs 10mM "each"! Controlla perchè mi sembra veramente molto strano!
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kiki_ale
Nuovo Arrivato



4 Messaggi

Inserito il - 15 novembre 2010 : 11:20:26  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di kiki_ale Invia a kiki_ale un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grazie mille GFPina, rifatto i calcoli ed è ok. Mi sono ritrovata delle provette già pronte in lab che non si leggono. Dovrebbe essere allora 10mM each! Grazie ancora.
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