Topoisomerasi I nei vettori di clonaggio

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Autore

Discussione

Vertigo
Nuovo Arrivato

Prov.: Bari
Citt�: Noicattaro

5 Messaggi

Inserito il - 01 giugno 2011 : 20:44:21

Ciao a tutti!!!

In qst giorni mi � capitato di utilizzare un vettore di clonaggio p-ScA della StrataClone (perdonate eventuali errori di scrittura) e mi sn imbattuto in un dubbio: nel protocollo fornito con il kit viene illustrato il vettore in tt le sue particolarit� e tra qst c'� la presenza della topoisomerasi I...ora vorrei riuscire a capire a cosa serve? So qual � il suo funzionamento ordinario e proprio x qst mi sfugge il senso della sua presenza

Perdonatemi se con qst domanda ho insultato l'intelligenza di qlc1

Vanilla Sky
Utente Junior

204 Messaggi

Inserito il - 02 giugno 2011 : 18:38:58

Ciao Vertigo,
figurati non insulti l'intelligenza di nessuno, anzi fai bene a chiedere!;)
Ti segnalo un vecchio post che magari ti pu� essere utile: http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=10756
Come sicuramente sai, esistono vari modi per "unire" le molecole di DNA, a seconda di come sono le estremit� e la DNA polimerasi I rappresenta uno dei metodi: infatti � in grado sia di tagliare che di unire molecole di DNA. Dall'immagine presente nel post che ti ho segnalato, puoi vedere che la sequenza del sito di taglio della topoisomerasi � CCCTT. L'enzima riconosce il sito e taglia il plasmide, creando cos� delle estremit� coesive di timina al 3' alle quali la topoisomerasi � attaccata. Successivamente quando aggiungerai il tuo inserto, che ha le estremit� coesive di adenina al 3'(la coda di adenine � aggiunta dalla Taq), la topoisomerasi non far� altro che saldare le due estremit� T-A complementari tra loro. Proprio per questo questa metodica viene chiamata anche clonaggio TA. Questo tipo di reazione � pi� veloce di quella catalizzata dalla DNA ligasi.
Spero di esserti stata d'aiuto.

Vertigo
Nuovo Arrivato

Prov.: Bari
Citt�: Noicattaro

5 Messaggi

Inserito il - 03 giugno 2011 : 12:08:23

Direi ke sei stata illuminate

Grazie mille Vanilla Sky