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Verdelacca
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5 Messaggi |
 Inserito il - 15 novembre 2006 : 23:00:55
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 a tutti!
Ho bisogno di un consiglio x' non so dove sbattere la testa 
Il mio problema è questo: devo far avvenire una reazione di immunofluorescenza su cellule simil-fibroblasti in sospensione al tempo zero.
Ho trovato questo protocollo e vorrei qualche consiglio da voi.
- risospendere il pellet in una soluzione di paraformaldeide al 3% in PBS (o meglio PFA 4%+ Saccarosio 2% in PBS?????) per 1 h
- effettuare tre lavaggi con PBS (centrifugando a quanto g? x quanto tempo?)
- risospendere con triton 0,1% in PBS per 1h a 4°C
- tre lavaggi in PBS (come prima??)
- seminare le cellule sui vetrini trattati per 1 h per permettere l'adesione
- per bloccare i siti aspecifici incubare le cellule con ??? BSA in PBS per ????
- incubare con l'anticorpo coniugato...distribuire sui vetrini (quanti microlitri??)
- lavare con PBS
- aggiungere una goccia di buffer di montaggio e farvi aderire un coprioggetto. esaminarli con il microscopio.
Potete aiutarmi?
grazie
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Immunofluorescenza su cellule
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