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Discussione

DanyD
Nuovo Arrivato

35 Messaggi

Inserito il - 07 aprile 2013 : 18:19:56

Ciao a tutti, ho una domanda sulla PCR a cui non riesco trovare risposta.
Nei vari step di ogni ciclo la temperatura cambia sensibilmente da uno step all'altro. In particolare si passa dai 90-95�C del primo step ai 60-65 del secondo. Questo fa s� che prima il DNA target si denaturi e poi, abbassando la temperatura, consento ai primer di legarsi al DNA da amplificare.
Ho letto che la temperatura di annealing media per un primer � di 50-60�C e che generalmente la temperatura di melting � di 5�C superiore.

Ma se cos� fosse, quando vado ad alzare la temperatura a 72�C nel terzo step per consentire alla TAQ-polimerasi di lavorare, non avrei il distacco dei primer dal DNA da amplificare?

Geeko
Utente

Citt�: Milano

1043 Messaggi

Inserito il - 07 aprile 2013 : 18:29:33

Stesso dubbio che era venuto a me tempo fa.
Trovi risposta in questa discussione che avevo aperto :)
http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=28921

DanyD
Nuovo Arrivato

35 Messaggi

Inserito il - 07 aprile 2013 : 18:41:39

Grazie mille Geeko! Pensavo di non aver capito qualcosa io.
Avevo pensato anch'io al fatto che la Tm si alzasse perch� la Taq-polimerasi comincia a sintetizzare.

Grazie ancora!