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Gaia_m
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2 Messaggi

Inserito il - 11 gennaio 2020 : 17:43:51  Mostra Profilo Invia a Gaia_m un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao :)
non ho ben capito come si legge questo grafico. Sapreste spiegarmi perchè l'anticorpo Lsm11, ma non igG ha coimmunoprecipitato con ALYREF (4A) e al contrario Lsm11 è stato rilevato nell'iimunoprecipitato di ALYRE (4B)? grazie a chi risponderà.

Immagine:

19,56 KB

domi84
Moderatore

Smile3D

Città: Glasgow


1722 Messaggi

Inserito il - 12 gennaio 2020 : 18:32:39  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di domi84 Invia a domi84 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao, usando la funzione cerca del forum puoi trovare delle risposte, tipo:
http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=12152&SearchTerms=immunoprecipitazione
Citazione:

La co-immunoprecipitazione si chiama così perchè immunoprecipiti la proteina con un anticorpo (come nell'immagine). A questa proteina saranno legate tutte le proteine con la quale lei interagisce. Quindi ci saranno una serie di proteine legate alla tua.

Ab -<*- Proteina - Altre proteine

Tu puoi usare un anticorpo per rilevare tramite western se fra queste "altre proteine c'è quella di tuo interesse.

Ab -<*- Proteina - Altre proteine -*>- Ab di interesse

Ovviamente se la tua proteina c'è vedrai la banda sul tuo western. Alrimenti no.



o http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=34915&SearchTerms=immunoprecipitazione
Citazione:

Partiamo dall'immunoprecipitazione in generale (Maggiori info qui: https://en.wikipedia.org/wiki/Immunoprecipitation):
L'estratto proteico sono tutte le proteine di una cellula (questo è quello che si chiama input o totale). Da queste immunoprecipiti (cioè tiri via con un anticorpo legato ad una "biglia di plastica") la tua proteina d'interesse (in questo esperimento FLAG-PAX6) per vedere se la seconda proteina di interesse viene giù con la prima (in questo caso KAP1 o RCOR3).
Prima di guardare il risultato si fanno una serie di controlli per essere sicuri che niente sia andato storto: Si caricano TUTTI gli input per dimostrare che le proteine erano presente in origine prima dell'immunoprecipitato, si verifica che hai realmente immunoprecipitato la prima proteina di interesse, si dimostra che non hai nessuna banda se trasfetti solo la seconda proteina (o comunque una piccola piccola come in questo caso), infine si guarda al risultato (dove hai trasfettato le due proteine contemporanemte).



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Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
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