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Autore

Discussione

scams
Nuovo Arrivato

Prov.: mantova
Città: castiglione d/s

1 Messaggi

Inserito il - 29 settembre 2003 : 13:44:43

buongiorno:
quanto DNA mi serve per fare una buona reazione di ligasi ?
-devo inserire un DNA prodotto con PCR e purificato da gel di agarosio nel vettore che ho espanso mediante una maxi-prep..
un'altro problema e che non so se il mio DNA di partenza (sia quello da inserire che l'altro del mio vettore d'espressione mi si taglia con 2 enzimi di restrizione (che non hanno un buffer comune).
non posso sprecare tanto materiale...
grazie tanto e spero che qualcuno mi aiuti veramente...
urgente

scams

atreliu
Amministratore

Prov.: Milano
Città: Milano

2484 Messaggi

Inserito il - 29 settembre 2003 : 16:09:18

Dunque..
Per quanto riguarda la presenza di enzimi di restrizione in comune.. tra i due frammenti da unire, bhè..
Il vettore si suppone sia commercializzato, quindi con almeno porzioni / geni, conosciuti.
Per quanto riguarda il frammento da inserire...
una possibilità come descritta in.. http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=42&FORUM_ID=14&CAT_ID=3&Topic_Title=Amplificazione+GeneF41&Forum_Title=Clonaggio era quella di aggiungere delle ali ai primer della pcr, che ti avrebbero permesso di inserire un sito di restrizione all'esterno del frammento. Sito che ovviamente va scelto perchè comune al vettore.
Il tuo che vettore è?

Per quanto riguarda le reazioni di ligazione, potresti trovare maggiori informazioni qui: http://www.molecularlab.it/relazioni/dna_ricombinante/04_ligazione_trasformazione.asp
dove è descritto una relazione di reazione di ligazione (scusate il gioco di parole..).

Grazie per esserti iscritto,

Riky