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 domandina spettrofotometria!
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michelotta
Nuovo Arrivato

Prov.: Cagliari
Città: CAGLIARI


8 Messaggi

Inserito il - 03 gennaio 2008 : 10:25:42  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di michelotta Invia a michelotta un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ragazzi...avrei una domandina sicuramente per voi ovvia...
Non capisco perchè ogni volta che si usa lo spettrofotometro si deve fare una curva standard.
Vi riporto il testo dei miei appunti che non riesco a comprendere:
"se io ho un siero, con lo spettrofotometro posso calcolare la densità ottica per conoscere la concentrazione delle sostanze contenute all'interno; volendo conoscere, ad esempio, la concentrazione del glucosio, posso farlo solamente se raffronto la DO del mio campione con quella di una curva standard di taratura; per costruire una curva standard devo avere almeno due punti quindi almeno due soluzioni a concentrazione nota 8standard) e scalare dell'analita in esame".

mi sapete aiutare? grazie mille

Biotecnologo1987
Nuovo Arrivato

Future

Prov.: Teramo
Città: teramo


100 Messaggi

Inserito il - 03 gennaio 2008 : 10:40:10  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Biotecnologo1987 Invia a Biotecnologo1987 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Allora ci proverò io...ho fatto un'esperienza di spettrofotometria per il dosaggio proteico...in cui ho usato uno stanbard (BSA)che mi serve da guida...quando dici che la retta deve avere almeno 2 punti volevi dire forse che NON hai bisogno di 2 sostanze diverse ma raffrontare l'A ottenuta con una prima m isurazione della BSA in cui conosci la quantità, con il valore di A del tuo campione che non sai quant'è!!!devi sapere che c'è una relazione di proporzionalità diretta tra la quantità di luce assorbita e la conc della nostra sostanza X nel tuo caaso il Glucosio.cioè in pratica la BS serve solamente a diminuire il margine d'errore che si può ottenere con lo spettrofotometro (non più rette ma parabole asimmetriche).Prendendo quindi la BSA a diverse conc, lo spettroftmtr rileverà Assorbanze diverse...io personalmente ho fatto un Bradford...rispondendo alla tua domanda si fà la curva di taratura se vuoi conoscere la conc proteica di un campione qualsiasi(pezzetto di muscolo o fegato ecc...)ho un protocollo preso a lezione se vuoi te lo scrivo...ciao ciao spero di esserti stato di aiuto...

Davide*
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michelotta
Nuovo Arrivato

Prov.: Cagliari
Città: CAGLIARI


8 Messaggi

Inserito il - 03 gennaio 2008 : 10:41:36  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di michelotta Invia a michelotta un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
si si scrivimi il protocollo grazie mille gentilissimo
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Nick_row
Utente Junior




361 Messaggi

Inserito il - 03 gennaio 2008 : 13:53:29  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Nick_row Invia a Nick_row un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
la curva standard,ovvero la curva ottenuta con 2 o più punti a conc nota è indispensabile per risalire alla conc del campione "incognito"!tu prendi,per esempio,5 soluzioni della sostanza X alle conc di 0,1,2,4,8 ng/ml...queste ti daranno 5 valori di OD e tu costruirai una retta(o curva) data da Conc VS OD...poi,in base all'OD che darà il tuo campione incognito,confrontandolo con gli OD dei punti della curva,potrai capire la conc del tuo camp incognito (è l' "interpolazione")!
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 07 gennaio 2008 : 22:55:15  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
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