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Autore Discussione  

Pam
Nuovo Arrivato

Prov.: Roma
Città: roma


9 Messaggi
Inserito il - 31 marzo 2008 : 12:42:14  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Pam Invia a Pam un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
...ciao sono Pamela,ho eseguito il mio primo stripping ed ho qualche dubbio sulla riuscita....forse è stato già chiesto comunque...quando lo eseguo è normale che la soluzione (stripping solution della Pierce) non imbibisca completamente la membrana di PVDF?....

accetto consigli...
grazie mille

chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi
Inserito il - 31 marzo 2008 : 13:10:51  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Non ho mai usato la stripping solution della pierce quindi non ti saprei dire.

Comunque non è niente di complesso, la puoi fare benissimo tu... vedi:
http://www.molecularlab.it/protocolli/protocol.asp?id=27
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Ely86
Nuovo Arrivato

Città: milano


100 Messaggi
Inserito il - 05 febbraio 2011 : 17:40:31  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Ely86 Invia a Ely86 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao ho visto ed eseguito anche in laboratorio questo metodo ma non capisco per il rilevamento siamo un macchinario detto"codac" (non so se si scrive cosi)che rileva l'intensita delle bande e da poi un valore.
Come funziona questo strumento e come si chiama?grazie
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi
Inserito il - 05 febbraio 2011 : 18:14:13  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Immagino sia un densitometro.

PS: sarà mica Kodak (la marca)?
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SpemannOrganizer
Utente

Spemann

Città: Los Angeles


955 Messaggi
Inserito il - 05 febbraio 2011 : 18:34:38  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di SpemannOrganizer Invia a SpemannOrganizer un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
o chemidoc?
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Ely86
Nuovo Arrivato

Città: milano


100 Messaggi
Inserito il - 07 febbraio 2011 : 08:23:14  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Ely86 Invia a Ely86 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
OK grazie sarà un densitometro e allora la marca sarà Kodak scusate ma è la prima volta che sono in un laboratorio e sono confusa su tutto!!Percio determino la densità delle bande o l'intensità?
grazie!
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi
Inserito il - 07 febbraio 2011 : 08:56:53  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Beh, dipende, puoi misurare le 2. Fai una rivelazione fluorescente/luminescente o sviluppi su lastra fotografica?

Nel primo caso misuri l'intensità luminosa nel secondo caso la densità della banda (quanto "ha annerito" la lastra fotografica)
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Ely86
Nuovo Arrivato

Città: milano


100 Messaggi
Inserito il - 07 febbraio 2011 : 20:50:14  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Ely86 Invia a Ely86 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Allora io prima faccio lo stripping alla mei metto anticorpo primario faccio i lavaggi poi metto anticorpo secondario faccio lavaggi e in fine metto la perossidasi di rafano e posiziono la membrana su un lucido(sai quei lucidi dove i prof scrivono sopra durante le lezioni)e appoggio il foglio sul macchinario e poi visualizzo l'immagine e tutte le bande,poi con un programma faccio dei qudrati intorno alle bande e il computer calcola un parametro detto netx intensity dopo mi fanno fare dei conti con excel..
percio io cosa calcolo l'intensità delle bande?
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi
Inserito il - 08 febbraio 2011 : 22:56:50  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
posiziono la membrana su un lucido(sai quei lucidi dove i prof scrivono sopra durante le lezioni)

A meno che utilizziate qualche macchinario strano... quei "lucidi" sono in realtà lastre fotografiche!

Citazione:
percio io cosa calcolo l'intensità delle bande?

No! Stai misurando la densità delle bande. Le bande sono nere su una lastra trasparente, tu ne guardi la densità, ovvero quanta luce ci passa attraverso. Meno luce passa più la banda è densa, più era forte il segnale che ha generato la banda.
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