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simostef
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63 Messaggi
Inserito il - 10 aprile 2008 : 18:29:36  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di simostef Invia a simostef un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
nell' ibridazione in situ, ch cosa vuol dire fissazione del campione, come si fà?ovunque c'è scritto: "dopo la fissazione..." ma nessuno dice che è sta fissazione, e per me sta diventando una fissazione... vebbè battutaccia... ma qualquno sa cos'è?

GFPina
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GFPina

Città: Milano


8408 Messaggi
Inserito il - 10 aprile 2008 : 19:18:12  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
La fissazione è necessaria per preservare la morfologia cellulare.
Esistono vari tipi di fissativi (utilizzati sia in immunoistochimica/citochimica che per l'ibridazione in situ)
Trovi alcuni esempi in questo protocollo: http://www.molecularlab.it/protocolli/protocol.asp?id=22
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simostef
Nuovo Arrivato




63 Messaggi
Inserito il - 10 aprile 2008 : 19:24:44  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di simostef Invia a simostef un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
grazie, ma mica sai pure quali sono i controlli che possono essere fatti con la ISH?
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GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8408 Messaggi
Inserito il - 10 aprile 2008 : 23:03:45  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Di solito come controllo si utilizza una sonda complementare che non ibridizza (controllo negativo).
Spiegandomi meglio, la sonda che utilizzi è complementare all'RNA che vuoi andare a vedere e quindi si lega a questo, se invece disegni una sonda con sequenza uguale all'RNA questa non si lega e serve come controllo negativo.
Poi puoi utilizzare come controlli anche tessuti o cellule dove sei sicura che sia espresso (controllo positivo) o non espresso (controllo negativo) l'RNA che cerchi.
Dimenticavo prima ma nella sezione protocolli ci sono anche protocolli per la ISH:
Disegno sonde per ibridazione in situ
Sintesi di probe radioattiva per in situ
In situ hybridization radioattiva

Inoltre qua trovi altre informazioni che ti possono essere utili:

Le tecniche di ibridazione in situ (ISH).pdf
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simostef
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63 Messaggi
Inserito il - 10 aprile 2008 : 23:09:35  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di simostef Invia a simostef un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
grazie 1000!
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