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Discussione |
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celeste107
Nuovo Arrivato
6 Messaggi |
 Inserito il - 30 novembre 2008 : 12:47:57
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sicuramente ¨¨ una domanda stupida... ho una concentrazione di DNA pari a 2500 ng/¦Ìl e per la metodica che devo utilizzare devo partire da 100 ng. Come faccio a diluirlo?
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 30 novembre 2008 : 13:07:35
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Hai dei sacchetti di mele con 2500 mele per sacchetto.
Devi prendere 100 mele.
Che frazione del sacchetto devi prendere? |
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Schuldiner86
Utente Junior
Prov.: Viterbo
Città: Bologna
581 Messaggi |
Inserito il - 30 novembre 2008 : 17:30:40
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| Una volta capite quante mele però devi capire anche in che volume di sacchetto sono contenute quelle mele... =P |
 
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Giuliano652
Moderatore
Prov.: Brescia
6940 Messaggi |
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valia
Moderatore
Prov.: UK
1001 Messaggi |
Inserito il - 30 novembre 2008 : 19:29:53
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Citazione:
Infatti, meglio parlare di frazioni di mele che di numero assoluto di mele, come poi fa chick
Per essere pignoli fino in fondo... Si puo' parlare di numero di mele, e di frazione di sacchetto!!  |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 30 novembre 2008 : 19:54:14
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Citazione:
Per essere pignoli fino in fondo... Si puo' parlare di numero di mele, e di frazione di sacchetto!!
Torna all'inizio della Pagina
Che poi è quello che ho scritto io... visto che celeste sta cercando di avere 100ng di DNA, non importa il volume. |
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maddalena bertante
Nuovo Arrivato
84 Messaggi |
Inserito il - 16 dicembre 2008 : 14:15:44
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| Ma ! questo DNA c'è l'hai in soluzione acquosa? |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 16 dicembre 2008 : 20:06:34
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Citazione:
Messaggio inserito da maddalena bertante
Ma ! questo DNA c'è l'hai in soluzione acquosa?
Beh il DNA in genere si è in soluzione acquosa, acqua o TE (sopratutto se si parla di concentrazione in ng/ul).
Le mele invece in genere non sono in soluzione acquosa!  |
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Patrizio
Moderatore
Città: Barcellona
1912 Messaggi |
Inserito il - 16 dicembre 2008 : 20:12:48
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| la doveva dire per forza... |
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Ayla
Utente Junior
Città: Wageningen
573 Messaggi |
Inserito il - 17 dicembre 2008 : 11:59:14
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secondo me celeste non si è espressa benissimo perché nel titolo e nell'ultima parte chiede chiaramente "come diluire" il DNA, quindi forse anziché voler 100ng di DNA vuole una soluzione con 100ng/ul...
Se la mia ipotesi è corretta, allora il discorso delle mele è un po' diverso e bisogna considerare giustamente il volume del sacchetto.
Tipo: Un camion porta 2500 mele. Se la nuova legge impone che ogni camion può portare solo 100 mele, quanti camion bisognerà aggiungere per portare tutte le mele a destinazione? |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 17 dicembre 2008 : 12:37:46
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Citazione:
Messaggio inserito da Ayla
secondo me celeste non si è espressa benissimo perché nel titolo e nell'ultima parte chiede chiaramente "come diluire" il DNA, quindi forse anziché voler 100ng di DNA vuole una soluzione con 100ng/ul...
Non sono d'accordo!
Può benissimo essere che abbia una metodica in cui dice che devi utilizzare 100ng di DNA, ad esempio devi fare una reazione di restrizione da 100ng di DNA quindi ne devi prende 100ng da mettere nella soluzione finale! Di fatto fai una diluizione perchè metti un certo volume che avrà una certa concentrazione in un volume superiore, ma la cosa che ti interessa è avere esattamente 100ng!
Quindi in questo caso devi sapere a quanti ul di una soluzione 2500 ng/ul corrispondono 100ng in modo da prendere quella "quantità".
Secondo me celeste è stata chiara!
Citazione:
Messaggio inserito da celeste107
... per la metodica che devo utilizzare devo partire da 100 ng.
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Ayla
Utente Junior
Città: Wageningen
573 Messaggi |
Inserito il - 17 dicembre 2008 : 13:20:04
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Infatt, io ho parlato di "ipotesi". Non essendo veggente non so cosa ci fosse nella testa di celeste. Però la mia alternativa potrà forse tornare utile a chi avrà una domanda simile e sceglierà questo topic in base al titolo...
caso A) prendere 1/25 di un microlitro (mi sembra un po' dura ma forse c'è qualche strumento in grado di farlo)
caso B) aggiungere 24 volumi di h2o o TE e poi prendere un microlitro per l'esperimento... |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 17 dicembre 2008 : 17:15:50
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A me sembrava chiaro quello che chiedeva celeste, tutto qua!
Citazione:
Messaggio inserito da Ayla
caso A) prendere 1/25 di un microlitro (mi sembra un po' dura ma forse c'è qualche strumento in grado di farlo)
In quel caso si utilizzano delle diluizioni seriali!
Anzi se dobbiamo andare per ipotesi allora potrebbe anche essere questo che chiedeva celeste, "come posso diluirlo per portarlo ad una concentrazione tale per cui possa prendere 100ng in un volume ragionevole?"
Ad esempio lo diluisci 1:100, ottieni una concentrazione di 25ng/ul e per prenderne 100ng basta che ne prendi 4ul di questa soluzione diluita!
Oppure come dici tu per il secondo caso:
Citazione:
Messaggio inserito da Ayla
caso B) aggiungere 24 volumi di h2o o TE e poi prendere un microlitro per l'esperimento...
Diluisci 1:25, ottieni una concentrazione di 100ng/ul e se prendi 1ul hai 100ng!
Ma scusa ma la differenza tra i due casi qual'è? 
Diverso è se la domanda era, come hai ipotizzato prima, che bisognasse portarlo ad una concentrazione finale 100ng/ul, se lo porti già a quella concentrazione poi non puoi metterlo in una reazione finale che deve essere 100ng/ul, perchè lo diluiresti ulteriormente.
Non so se sono stata chiara? |
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Giuliano652
Moderatore
Prov.: Brescia
6940 Messaggi |
Inserito il - 17 dicembre 2008 : 17:54:53
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In virologia normalmente si hanno degli stock di virus con un certo titolo, ad esempio virus influenzale stockato con titolo pari a 256 HAU, poi negli esperimenti se ne usava sempre molto di meno, ad esempio poteva capitare che se ne usasse solo 2 HAU. Che si fa? Il titolo è normalmente espresso in ml, cioè è da considerarsi 256 HAU/ml (per motivi storici mi disse la prof, che non sto qui ad approfondire), per avere 2 HAU da quei 10 ml di virus titolato a 256 HAU semplicemente se ne prendeva 1/128, cioè su 10 ml si prendevano 78 ul circa. Ovviamente non direttamente, si facevano diluizioni seriali (per massimizzare l'omogeneità della soluzione), ma il concetto è: se prendo 1/128 della madre prendo sempre una concentrazione di 256 HAU/ml, ma prendo una piccola parte del virus che c'è, in questo caso prendo 1/128 del totale dei virioni presenti (assumendo che siano distribuiti equamente in tutto il volume), quindi, ai fini della coerenza dell'esperimento, si consideravano 2 HAU prese.
Stessa cosa per diluizioni di DNA, NaCl, glucosio o chissà che altro: prendo sempre una parte del totale da una soluzione: quanta? La porzione che mi son prefissato, quindi, tornando alle mele: prendiamo una parte di mele, quante? 1/25, quindi prendere 1/25 di soluzione è come prendere 1/25 di soluto |
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kiaretta
Nuovo Arrivato
32 Messaggi |
Inserito il - 19 novembre 2009 : 17:20:51
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Rispolvero questo topic sperando che qualcuno possa darmi una dritta! :)
es.
Parto da una concentrazione di 86 microgrammi/mL di DNA e devo arrivare a 10 ng per poter fare la mia reazione. il volume finale di DNA che devo avere nella reazione (devo fare un PCR Real Time) deve essere 10 ml.
io pensavo di fare così:
applico la formula Ci x Vi = Cf x Vf
come Ci ho 86 microgrammi/ml
il Vi è quello che devo trovare
come Cf ho 10 ng
e come Vf ho 10 ml
quindi la quantità di Dna che devo prendere per avere 10 ng in 10 ml sono:
(86 x 10)/ 10 = 86 ??
no, c'è qualcosa che non va....
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 19 novembre 2009 : 18:24:38
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o usi microgrammi o usi nanogrammi, se mischi i due non ti ritroverai mai
Ad ogni modo tu hai 86ug/ml = 86000ng/ml e vuoi arrivare a 10ng/10ml, ovvero 1ng/ml
Quindi devi fare una diluizione 1:86000
Vuoi 10 ml quindi 10/86000 ~= 0.000116 ml = 0.116 ul
===
Per conferma:
La soluzione iniziale è 86 ug/ml ovvero 86 ng/ul
in 0.116 ul di questa soluzione ci saranno 0.116*86 = 9.976 ~= 10 ng di DNA (non viene esattamente 10 perchè ho approssimato nell'ultima divisione)
PS: siccome 0.116 ul sono difficili da pipettare ti conviene fare una soluzione intermedia ad es. 50 volte più concentrata e poi diluirla. |
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