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Biotecgen
Utente Junior
Città: Napoli
191 Messaggi |
 Inserito il - 03 febbraio 2009 : 14:20:18
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Salve ragazzi
avrei una curiosità da porvi:
nel lab in cui lavoro usiamo per i western un tris HCl lower a ph 8,8.
secondo voi una leggera variazione di ph, tipo intorno a 9,2-9,3 potrebbe compromettere la corsa delle proteine e quindi il risultato?
grazie.
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non esistono domande indiscrete...le risposte a volte lo sono. |
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Giuliano652
Moderatore
Prov.: Brescia
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Biotecgen
Utente Junior
Città: Napoli
191 Messaggi |
Inserito il - 03 febbraio 2009 : 14:51:59
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ok giuliano, allora riposto la domanda:
Salve ragazzi
avrei una curiosità da porvi:
nel lab in cui lavoro usiamo per i western un tris HCl lower a ph 8,8.
secondo voi una "non-leggera" variazione di ph, tipo intorno a 9,2-9,3 potrebbe compromettere la corsa delle proteine e quindi il risultato?
grazie.
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Giuliano652
Moderatore
Prov.: Brescia
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mattia.dinunzio
Nuovo Arrivato
116 Messaggi |
Inserito il - 03 febbraio 2009 : 15:17:14
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 03 febbraio 2009 : 16:00:09
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Innanzittutto scrivi "pH", c'é gente che é stata bocciata agli esami per aver scritto ph o Ph!
Comunque concordo con Giuliano, meglio rifare la soluzione o aggiungerci un po' di HCl per portarla a pH (cosí evito di scrivere pHare!  ).
In ogni caso, se vuoi una risposta giusto per curiositá tieni presente che:
- il pka della glicina é circa 9,7 quindi a pH 9,2-9,3 la glicina sará leggermente piú negativa che a pH 8,8
- il pH del gel di corsa in genere é leggermente superiore del pH del buffer di elettroforesi (in genere Buffer 8,3 e gel 8,8)
- in generale é "peggio" se il pH del gel di corsa é troppo basso (la glicina non é abbastanza carica negativamente), mai scendere sotto pH 8
- in "teoria" un pH piú elevato non dovrebbe creare grossi problemi, in genere peró si arriva fino a pH 9.
detto questo, anche se "teoricamente" non dovrebbe compromettere la corsa delle proteine, io non rischierei, ma come detto rifarei la soluzione o la porterei a pH 8,8-9,0 con HCl.
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Biotecgen
Utente Junior
Città: Napoli
191 Messaggi |
Inserito il - 04 febbraio 2009 : 12:50:13
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Ok pH
ringrazio tutti in particolare Giuliano per la sua "chiarezza"
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Giuliano652
Moderatore
Prov.: Brescia
6942 Messaggi |
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Biotecgen
Utente Junior
Città: Napoli
191 Messaggi |
Inserito il - 05 febbraio 2009 : 14:17:47
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A titolo informativo effettivamente è così (ma non che io non mi fidassi di voi  )
ho fatto due gel al 10%, uno usando TrisHCl a pH 8.8 e l'altro a pH 9.2
il risultato è stato che pur utilizzando le stesse condizioni, a differenza del gel fatto col tris a pH 8.8 per l'altro gel non ho ottenuto risultati già col rosso ponceau e nemmeno poi allo sviluppo.
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 05 febbraio 2009 : 22:33:31
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| Beh già che hai fatto la prova sarebbe stato interessante colorare il gel con Coomassie per vedere com'era! (giusto per curiosità) |
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Biotecgen
Utente Junior
Città: Napoli
191 Messaggi |
Inserito il - 06 febbraio 2009 : 13:06:51
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Si Pina , ho anche colorato il gel con Comassie, il risultato è stato che le bande sono risultate visibili solo all'apice del gel. La cosa di cui mi sono pentito è di non aver fatto il comassie anche per l'altro gel dopo il trasferimento.
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Ph tris-HCl per western
Didattica e Relazioni
