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tambua
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Inserito il - 27 agosto 2009 : 17:05:27  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di tambua Invia a tambua un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Salve ragazzi,
sto studiando i sistemi di espressione basati su Baculovirus, però mi è sorto un dubbio: cosa si intende per supernatante della coltura cellulare? Questo virus non crea un effetto citopatico? Il testo riporta "il supernatante di queste cellule infette conterrà praticamente il virus ricombinante che verrà prelevato ed amplificato; qualcuno è in grado di spiegarmi questo passaggio?
Sicuramente non ho chiaro il concetto di supernatante da una coltura e di amplificazione del virus (dove? in altre cellule?).
Grazie a chi vorrà aiutarmi

Giuliano652
Moderatore

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Prov.: Brescia


6911 Messaggi

Inserito il - 27 agosto 2009 : 17:40:56  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Giuliano652 Invia a Giuliano652 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Quando infetti una coltura con un virus questo si replica, e i virioni "nuovi" li trovi nel supernatante oltre che nelle cellule, ovvero nel liquido (terreno o quel che hai messo dopo l'infezione) che sta sopra alle cellule. In pratica, invece di scrivere "terreno o quel che hai messo dopo l'infezione" millemila anni fa si sono inventati la parola "supernatante"

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tambua
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50 Messaggi

Inserito il - 27 agosto 2009 : 17:53:20  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di tambua Invia a tambua un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
:)
Grazie Giuliano,
E per amplificare il mio virus devo utilizzare il "supernatante" come inoculo per infettare una nuova coltura di cellule fresche vero?
Scherzi a parte sapresti consigliarmi un buon testo in cui sia spiegata bene la titolazione virale? Intendo concetti quali MOI,pfu/ml ecc.... perchè ho letto dei post precedenti e dalle risposte che hai dato mi è sembrato che ci lavori a gomito con i virus :)

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Giuliano652
Moderatore

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Prov.: Brescia


6911 Messaggi

Inserito il - 27 agosto 2009 : 18:20:39  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Giuliano652 Invia a Giuliano652 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ci lavoravo, e sono tutt'ora una mia passione. Però ora faccio tutt'altro :-)

Testi per la titolazione non saprei, ogni testo di virologia ha almeno le basi, certo non hanno dei veri e propri protocolli, ma la teoria la spiegano. Esiste però un testo di tecniche di virologia (di cui non ricordo né titolo, né autore, né lingua, se italiano o inglese) che era nel mio lab. Se ti interessa faccio un giro di telefonate/email e in qualche giorno potrei riuscire a postarti il titolo

PS: per "amplificazione" si intende un'infezione fatta allo scopo di avere più virus di quanto se ne abbia in quel momento. Segue alcune regole, tipo ci vuole basso titolo virale, cellule competenti eccetera, ma normalmente si moltiplica di molti ordini di grandezza la quantità di virus a nostra disposizione (e i virioni nuovi si trovano nel supernatante, o surnatante (parola che faceva venire i brividi alla mia veccha prof))

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tambua
Nuovo Arrivato



50 Messaggi

Inserito il - 27 agosto 2009 : 20:31:26  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di tambua Invia a tambua un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Con moltissimissima calma sì mi piacerebbe sapere il nome del libro.
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tambua
Nuovo Arrivato



50 Messaggi

Inserito il - 28 agosto 2009 : 14:52:42  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di tambua Invia a tambua un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Giuliano chiedo a te che sei diventato il mio mentore (scherzo),
cosa si intende per promotore minimo di CMV?
Ho anche fatto una ricerca su google alla voce "CMV minimal promoter" e penso di aver capito che sia la sequenza minima in grado di permettersi alla RNA polimerasi di legarsi e trascrivere...mi sembra però un pò pochetto.
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Giuliano652
Moderatore

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Prov.: Brescia


6911 Messaggi

Inserito il - 28 agosto 2009 : 17:06:56  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Giuliano652 Invia a Giuliano652 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
è quello che è...

il CMV è il citomegaluvirus e il minimal promoter è la sequenza di nucleotidi minima per far funzionare il promotore del CMV, insomma, le sequenze essenziali per il legame di polimerasi e fattori di strascrizione. Si usa come promotore per i geni reporter, in genere

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bite20
Nuovo Arrivato



13 Messaggi

Inserito il - 28 agosto 2009 : 19:32:55  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di bite20 Invia a bite20 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Io a suo tempo ho trovato molte info interessanti sui vari manuali dei kit in commercio, ce ne sono di tutti i tipi, evito i nomi per non fare pubblicità, ma iniziano tutti con il prefisso baculo-
Buona ricerca.. a presto.
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Dionysos
Moderatore

D

Città: Heidelberg


1913 Messaggi

Inserito il - 28 agosto 2009 : 19:44:31  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Dionysos  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Dionysos Invia a Dionysos un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Non resisto a fare l'appunto di saccenteria: ricorda, tambua,
che il sistema di espressione baculovirale non è un virus
ma un vettore, e come tale NON replica. Trasduce soltanto.

Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)

Less Jim Morrison, more Sean Morrison!


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tambua
Nuovo Arrivato



50 Messaggi

Inserito il - 24 settembre 2009 : 17:36:35  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di tambua Invia a tambua un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grazie
Macchè saccenteria, l'aiuto tra biologi e futuri biologi non è mai saccenteria... anzi
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