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sarmirna
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8 Messaggi

Inserito il - 22 novembre 2009 : 17:37:36  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di sarmirna Invia a sarmirna un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ragazzi vorrei avere da voi un consiglio. Da poco lavoro con linee cellulari, nello specifico con le Hela. Nel mio lab prima di splittarle e dopo aver tripsinizzato le cellule, mi fanno fare uno step aggiuntivo: le prendo, le risospendo in terreno completo in un tubo da 15 ml e le centrifugo per 10 minuti. dopodichè le risospendo e le splitto. questo perchè, mi dicono , riesco a eliminare tutta la tripsina aggiunta ( che dalle mie conoscenze, viene comunque disattivata con l'aggiunta del terreno). Voi cosa ne pensate??? Stresso eccessivamente le cellule con questo step aggiuntivo?? please let me know.

Sarmirna

Giuliano652
Moderatore

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Prov.: Brescia


6911 Messaggi

Inserito il - 22 novembre 2009 : 18:40:38  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Giuliano652 Invia a Giuliano652 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Oddio, una cura abbastanza eccessiva... centrifugare le cellule è abbastanza stressante, anche se le HeLa dovrebbero comportarsi bene. Se la centrifugazione è a bassi g direi che si può fare, ma di regola andrebbe evitata, non tutte le cellule la sopportano bene

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Dionysos
Moderatore

D

Città: Heidelberg


1913 Messaggi

Inserito il - 22 novembre 2009 : 19:01:47  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Dionysos  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Dionysos Invia a Dionysos un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Anche secondo me se puoi evitare è meglio, perchè i terreni
completi contengono inibitori della tripsina provenienti dal siero.

Se invece non usi terreni completi di siero, il discorso cambia.

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(F.W. Nietzsche)

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sarmirna
Nuovo Arrivato



8 Messaggi

Inserito il - 22 novembre 2009 : 19:39:28  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di sarmirna Invia a sarmirna un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Uso terreni completi.
il mio collega ritiene che cantrifugare permette l'eliminazione di ogni minimo residuo che potrebbe inibire la nuova adesione cellulare. ma a me sta cosa nn mi ha mai convinto...metto meno tripsina e nn centrifugo piu ...deciso!!!!!!
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Dionysos
Moderatore

D

Città: Heidelberg


1913 Messaggi

Inserito il - 22 novembre 2009 : 19:54:02  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Dionysos  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Dionysos Invia a Dionysos un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
dieci volumi di completo inibiscono ogni minimo residuo di tripsina,
ma in realtà quasi tutti quelli che conosco ne usano molto meno

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Giuliano652
Moderatore

profilo

Prov.: Brescia


6911 Messaggi

Inserito il - 22 novembre 2009 : 20:03:51  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Giuliano652 Invia a Giuliano652 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
In ogni caso, se le cellule resistono si può fare, ma non è sempre una buona idea. Io quando tripsinizzavo usavo un velo di tripsina appunto per farne rimanere il meno possibile

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Iside
Utente Attivo

Iside_paradise

Città: Napoli


1375 Messaggi

Inserito il - 23 novembre 2009 : 12:40:22  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Iside  Invia a Iside un messaggio Yahoo! Invia a Iside un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Anche io centrifugo le HeLa per eliminare la tripsina, e non ho mai osservato cellule sofferenti dopo la centrifugazione. logicamente, non puoi mandare la centrifuga per troppo tempo, 2 minuti a 2000rpm sono più che sufficienti.


...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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