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Tommasina
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29 Messaggi

Inserito il - 08 febbraio 2010 : 17:02:27  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Tommasina Invia a Tommasina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Problemino su diluizioni di colture cellulari per esame urgente.
Ho fatto una conta cellulare di linfociti, risultato: 2 500 000 cells/ml . In tot ho 3 ml di sospensione cellulare. Devo sub coltivarle in modo da averne 400 000 a ml. Che calcolo devo fare? Che passaggio ci vuole per diluirle in questomodo? In che fiasca le metto? grazie a chi risponderà

mattia.dinunzio
Nuovo Arrivato



116 Messaggi

Inserito il - 08 febbraio 2010 : 17:10:55  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di mattia.dinunzio Invia a mattia.dinunzio un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
è la classica formula C1V1=C2V2.
2 500 000*3 = 400 000*X x=2 500 000*3/400 000 x=18.75.


Il tuo volume finale è 18.75ml, quindi devi aggiungere ai tuo 3ml di cellule 15,75ml di terreno. questo volume sta tranquillamente in una fiasca da 75cm2.


ciao
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 08 febbraio 2010 : 17:15:11  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Trovi tutte le spiegazioni qui!

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Giuliano652
Moderatore

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Prov.: Brescia


6923 Messaggi

Inserito il - 08 febbraio 2010 : 17:24:44  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Giuliano652 Invia a Giuliano652 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
alla domanda "in che fiasca le metto" io risponderei semplicemente con "dipende da quanti ml ti servono", essendo linfociti

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memole
Utente Junior

memole

Prov.: Brindisi
Città: brindisi


577 Messaggi

Inserito il - 08 febbraio 2010 : 19:00:36  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di memole Invia a memole un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Io personalmente nella fisca da 75 cm2 metto 15 ml, raramente arrivo ai 20 per evitare le contaminazioni. Se posso pòermettermi un consiglio non superare mai questo limite, altrimenti rischi che la sospensione sfiori il tappo e che la coltura si inquini.

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Tommasina
Nuovo Arrivato



29 Messaggi

Inserito il - 08 febbraio 2010 : 19:31:51  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Tommasina Invia a Tommasina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
grazie a tutti ma devo usare la fiasca per cellule in sospensione e la tengo in piedi, quindi mi baso semplicemente sul fatto che se in una T25 ne metto max 10 ml in una T75 ne metto 30, ma le cellule che ho io non mi bastano per fare una T75 con questo volume finale, dato che facendo il calcolo con la formula delle diluizioni devo prendere 5,75 e non li ho, ne ho solo 3 ml
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Giuliano652
Moderatore

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Prov.: Brescia


6923 Messaggi

Inserito il - 09 febbraio 2010 : 00:08:54  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Giuliano652 Invia a Giuliano652 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da Tommasina

grazie a tutti ma devo usare la fiasca per cellule in sospensione e la tengo in piedi, quindi mi baso semplicemente sul fatto che se in una T25 ne metto max 10 ml in una T75 ne metto 30, ma le cellule che ho io non mi bastano per fare una T75 con questo volume finale, dato che facendo il calcolo con la formula delle diluizioni devo prendere 5,75 e non li ho, ne ho solo 3 ml



oh beh, basta prenderne la metà e aspettare 24 ore che raddoppino le cellule, no?

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memole
Utente Junior

memole

Prov.: Brindisi
Città: brindisi


577 Messaggi

Inserito il - 09 febbraio 2010 : 18:33:26  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di memole Invia a memole un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
@ Giuliano Se sta avendo a che fare con una coltura primaria di linfociti non può, visto che sono cellule che non si dividono.

@ Tommasina In questo caso credo che l'unica soluzione sia quella di ridimensionare i trattamenti, tuo malgrado. Conosco bene la situazione, visto che ci ho a che fare. Devi solo avere tanta pazienza e non farti troppe illusioni, ma ad ogni isolamento vedi quante cellule trovi e poi organizzati il lavoro (sempre che tu riesca ad averne un numero sufficiente).

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Giuliano652
Moderatore

profilo

Prov.: Brescia


6923 Messaggi

Inserito il - 09 febbraio 2010 : 18:50:48  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Giuliano652 Invia a Giuliano652 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da memole

@ Giuliano Se sta avendo a che fare con una coltura primaria di linfociti non può, visto che sono cellule che non si dividono.




primaria? Ops, non l'avevo letto...

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memole
Utente Junior

memole

Prov.: Brindisi
Città: brindisi


577 Messaggi

Inserito il - 09 febbraio 2010 : 18:58:24  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di memole Invia a memole un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Non l'ha scritto, ma visto che si pone il problema che gli ml che ha disposizione sono solo quelli credo che possa trattarsi proprio di quella.

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bububebè
Utente Junior

shampoo

Prov.: Na
Città: Napoli


255 Messaggi

Inserito il - 20 aprile 2010 : 20:10:19  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di bububebè Invia a bububebè un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao ragazzi!!! Ho notato che ci sono varie discussioni in proposito e per questo posto qui!
Allora ho un piccolo dubbio sul procedimento per effettuare una conta cellulare... consideriamo un piccolo problemino di questo tipo:
- 6000 c./cm2 in 6 piastre da 60mm
Ecco qual è il mio procedimento:

Per conoscere la quantità di cells da ottenere in 1 piastra da 60mm, sapendo che la sua superficie è di 21cm2 faccio
6000 x 21 cm^2 = 126000

Questo valore va moltilplicato per 6 in modo da ottenere il n°di cells totali che mi servono
126000 x 6= 756000


Fatto ciò, prendo la mia coltura, applico il protocollo di tripsinizzazione, e dopo centrifugazione, mettiamo caso che risospendo il pellet in 10ml; prendo dalla sospensione una certa aliquota, aggiungo lo stesso volume di Trypan Blue e faccio la conta con camera di Burker.
Mettiamo caso che la media aritmetica sia 50, faccio
50 x 10000 x 2 x 10= 10 milioni di cells

Vi trovate che devo moltiplicare anche per 10 ml?

Adesso devo prelevare da questi 10 milioni le 756000 cells che mi servono per piastrare le 6 plastiche con quella specifica concentrazione e per questo devo sapere qual è il volume in cui sono contenute tali cells... applico la proporzione e faccio
10 milioni : 10 ml = 756000 : x

x = 756000 x 10 / 1o milioni   => x = 0.756 ml

Ora questi rappresentano gli ml che devo prelevare che contengono le 756000 cells... ora vi trovate che per piastrare 126000 cells in OGNI PIASTRA devo fare questo valore diviso 6?? ossia
0.756 / 6 = 0.126 ml


Ragazzi per favore mi correggete dove ho sbagliato?
Vi ringrazio immensamente!

★°•. єѕтяєℓℓα .•°★
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memole
Utente Junior

memole

Prov.: Brindisi
Città: brindisi


577 Messaggi

Inserito il - 21 aprile 2010 : 16:27:59  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di memole Invia a memole un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Da quello che leggo non mi sembra ci siano errori...Quando fai la conta tu praticamente moltiplichi

la media delle cellule contate x il fattore di diluizione della camera x il fattore di diluizione con il Trypan x gli ml totali di sospensione

quindi è giusto. Anche la proporzione mi sembra impostata correttamente...


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bububebè
Utente Junior

shampoo

Prov.: Na
Città: Napoli


255 Messaggi

Inserito il - 21 aprile 2010 : 23:39:37  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di bububebè Invia a bububebè un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao memole!! Grazie per l attenzione e per avermi risposto!!!

★°•. єѕтяєℓℓα .•°★
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