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stella 86
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Inserito il - 09 febbraio 2010 : 21:32:51  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di stella 86 Invia a stella 86 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Salve a tutti...
Vorrei che mi aiutaste a capire perche' si parla di proteine di fusione nell'espressione genica..
Sul mio testo c'è scritto che quando voglio esprimere una proteina di fusione la sequenza codificante la proteina eterologa..(cioe' estranea)puo' essere inserita in testa o in coda rispetto a quella della proteina ospite ..ma come??? Come si sintetizza la proteina di fusione?

stella 86
Nuovo Arrivato



35 Messaggi

Inserito il - 09 febbraio 2010 : 23:29:38  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di stella 86 Invia a stella 86 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
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stella 86
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Inserito il - 10 febbraio 2010 : 10:08:19  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di stella 86 Invia a stella 86 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Invece di perdere del tempo con H2O che a mio avviso tutto voglia tranne che una mano in molecular , c'è qualcuno di voi che sa' indirizzarmi sul quesito posto ???
Spero che gfpina mi aiuti come sempre !! l'esame è tra pochissimoooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooo
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 10 febbraio 2010 : 10:13:26  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
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stella 86
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Inserito il - 10 febbraio 2010 : 10:29:20  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di stella 86 Invia a stella 86 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Scusami non volevo offendere nessuno...qui' c'è gente competente ma quello di gfpina è' l'unico nome che ricordo in quanto mi ha sempre risposto!! scusa ancora...aspettero' la risposta di esperti come te ma vado avanti da sola!! grazie mille e scusa ancora..non volevo offendere ...è solo che quando vedo che 10 esperti rispondono a un perditempo mi girano!
buona giornata!
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michy2
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Inserito il - 10 febbraio 2010 : 11:32:04  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di michy2 Invia a michy2 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao proverò ad aiutartiper espressione genica si intendono delle variazioni a livello dell'RNA messaggero, quindi uno studio sull'espressione genica è mirato a vedere variazioni di geni in seguito a diversi stimoli; non capisco il nesso con le proteine di fusione...non sempre il livello die spressione di un gene a livello del messaggero è correlato con la sua espressione proteica. per fare una proteina di fusione si usa in genere un vettore di espressione in cui inseriamo la sequenza della proteina che vogliamo trascrivere e tradurre, e a valle di questa sequenza si usa spesso un tag, cioè una sorta di "bandiera" che ci permette di identificare la proteina di interesse per esempio un tag di istidine facilemente identificabili con un western, o altri tag che possono legarsi a resine ecc. per produrre le proteine si usano cellule competenti batteriche; si inserisce il vettore in esse,si mettono in coltura e si estraggono le proteine.
spero di esserti stata utile
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stella 86
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35 Messaggi

Inserito il - 10 febbraio 2010 : 12:36:04  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di stella 86 Invia a stella 86 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
grazie mille per la risposta che mi ha chiarito dei concetti....ma hai delle immagini che mi aiutino a far capire l'inserimento in testa o in coda dellasequenza codificante la proteina eterologa rispetto a quella ospite??è qui il mio problema !
GENTILISSIMO!!
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michy2
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Inserito il - 10 febbraio 2010 : 12:58:53  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di michy2 Invia a michy2 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
si come si fa a inserire le immagini?
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michy2
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Inserito il - 10 febbraio 2010 : 13:03:27  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di michy2 Invia a michy2 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ti ho mandato l'immagine in un messaggio privato.
ps sono una ragazza
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stella 86
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Inserito il - 10 febbraio 2010 : 13:45:27  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di stella 86 Invia a stella 86 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
SEI UN TESORO
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stella 86
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Inserito il - 10 febbraio 2010 : 14:14:09  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di stella 86 Invia a stella 86 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
scusa ma dove l'hai inviato il messaggio di posta?
sulla mia email?
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stella 86
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35 Messaggi

Inserito il - 10 febbraio 2010 : 14:22:23  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di stella 86 Invia a stella 86 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
cortesemente inviami un sms qui(myaurora@live.it)
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michy2
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Inserito il - 10 febbraio 2010 : 14:26:08  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di michy2 Invia a michy2 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
guarda su messaggi in arrivo di questo forum
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stella 86
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Inserito il - 10 febbraio 2010 : 14:28:28  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di stella 86 Invia a stella 86 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
purtroppo non mi fa accedere
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michy2
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44 Messaggi

Inserito il - 10 febbraio 2010 : 14:34:16  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di michy2 Invia a michy2 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
che strano.....
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Stella86
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Inserito il - 10 febbraio 2010 : 14:36:15  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Stella86 Invia a Stella86 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
molto strano!!mi faresti un enorme favore se mi invii il contenuto del tuo sms di posta...cosi' comincio a studiare!
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michy2
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44 Messaggi

Inserito il - 10 febbraio 2010 : 14:36:32  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di michy2 Invia a michy2 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
prova a cliccare questo link www.biovisualtech.com/bvplasmid/pGEX-5X-3.htm
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michy2
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44 Messaggi

Inserito il - 10 febbraio 2010 : 14:38:23  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di michy2 Invia a michy2 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
in questa immagine vedi un vettore che contiene giò la sequenza per gst, che come ti dicevo si lega ad una resina e puoi identificarlo; a valle puoi inserire la tua sequenza codificante della proteina di interesse utilizzando gli enzimi di restrizione a monte di gst

Immagine:
www.biovisualtech.com/bvplasmid/pGEX-5X-3.htm
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Stella86
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42 Messaggi

Inserito il - 10 febbraio 2010 : 14:41:06  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Stella86 Invia a Stella86 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
grazieeee di cuore!sei stata gentilissima!
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Stella86
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42 Messaggi

Inserito il - 10 febbraio 2010 : 14:43:20  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Stella86 Invia a Stella86 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
anche se da quell'immagine nn ci ho capito un gran che'
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michy2
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44 Messaggi

Inserito il - 10 febbraio 2010 : 14:50:07  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di michy2 Invia a michy2 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
è la mappa di un vettore; in ogni vettore ci sono varie cassette di sequenza come per es la resistenza a un antibiotico, uno o due promotori, e una mappa di restrizione cioè ti indica che enzimi puoi usare per linearizzarlo e inserire una sequenza target. in questo vettore c'è una sequenza che codifica per gst (www.biovisualtech.com/bvplasmid/pGEX-4T-1.htm). a valle di essa ci sono le sequenze di taglio di alcuni enzimi. tu puoi utilizzare per es bamh1 e xho per tagliare il vettore e tramite una reazione di ligasi inserire la sequenza di interesse. una volta che inserisci il vettore in cellule batteriche competeti essi trascriveranno e tradurranno la tua proteina legata a gst. per recuperare la tua proteina di fusione utilizzi una resina che lega gst.
più chiaro ora?
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Stella86
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42 Messaggi

Inserito il - 10 febbraio 2010 : 15:07:10  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Stella86 Invia a Stella86 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
correggimi se sbaglio...io devo utilizzare lo stesso enzima sia per tagliare il vettore che la sequenza target giusto?? perche' ricordo che il mio professore mi diveva il contrario !
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michy2
Nuovo Arrivato




44 Messaggi

Inserito il - 10 febbraio 2010 : 15:18:22  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di michy2 Invia a michy2 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
si devi usare lo stesso oppure nella tua sequenza target aggiungi il sito di restrizione
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GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8398 Messaggi

Inserito il - 11 febbraio 2010 : 00:16:52  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Scusa Stella, ma non sempre c'è qualcuno disponibile a rispondere alle domande.
Tieni sempre presente che questo è un forum e chi partecipa sono studenti o persone che lavorano in laboratorio e rispondono durante il tempo libero, che spesso non è molto.
Io ad es. oggi non ne ho avuto un gran che e leggo il forum a quest'ora.
Inoltre tieni presente che a domande complicate è più difficile ottenere una risposta, appunto perchè ci vuole tempo a scriverle.
A una domanda a cui bisogna rispondere solo si o no è più facile rispondere anche con 5 minuti a disposizione.
Ma il bello del forum è che partecipano molte persone, quindi, se non può uno potrà un altro!

Inoltre il forum ha anche un'altra bella particolarità (anche quella riportata nel regolamento)
Citazione:
8) Il forum possiede una funzione "Cerca", ottima per cercate possibili topic (anche vecchi) che contengano già le risposte alle vostre domande.

Se l'avessi utilizzata avresti trovato ad es. discussioni tipo queste:
http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=6149
http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=13697
nell'ultima ho dovuto modificare l'immagine perchè non più disponibile, comunque le immagini le vengono da: http://en.wikipedia.org/wiki/His_tag
anche se non vuoi leggerti tutto guarda le immagini che sono esplicative!
ad es. questa: http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/0/0c/His-tag.png/764px-His-tag.png

Infine, scusa eh, ma non mi sembra il caso di tirare in ballo un utente che non sta partecipando al forum da tempo, accusando gli altri di perdere tempo con lui anziché rispondere a te.
In ogni caso tutti hanno gli sessi diritti qui e si cerca quanto meno di non fare preferenze. Se ad una domanda non viene risposto e ad un'altra si non è certo per fare favoritismi.



per rispondere alle altre domande

Citazione:
Messaggio inserito da michy2

si come si fa a inserire le immagini?

se l'immagine è un link utilizzi il tag image inserendo il link all'interno: [img ]link[ /img]
se invece è un'immagine tua che hai sul PC e vuoi allegare al forum utilizzi allega file. (attenzione al copyright)

Citazione:
Messaggio inserito da stella 86

purtroppo non mi fa accedere

se cerchi di accedere dal link che vedi alla tua destra a volte da dei problemi, era già stato segnalato qui: http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=12446
Il modo migliore per accedere ai messaggi privati è dalla pagina principale del forum: http://www.molecularlab.it/forum/default.asp
(in fondo trovi: Messaggi in arrivo)
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stella 86
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35 Messaggi

Inserito il - 14 febbraio 2010 : 15:58:55  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di stella 86 Invia a stella 86 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grazie gfpina....io cerco ma nn so' perche' ogni volta nn mi da' nulla! penso sia relato ai miei problemi di connessione...prima di aprirsi una pagina sto 2 ore!
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