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Superbs
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6 Messaggi

Inserito il - 12 novembre 2011 : 11:13:01  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Superbs Invia a Superbs un Messaggio Privato  Rispondi Quotando

Ciao. Spero che qualcuno mi possa rispondere. In laboratorio quando le cellule arrivano a confluenza (in una flask da 10 ml) devo staccarle con tripsina e risospenderle nel medium. Ogni volta mi dicono "fai una diluizione 1:2 o 1:10 o 1:12" ma cosa vuol dire?
All'inizio pensavo volesse dire (ad es nel caso diluizione 1:10) che dovessi mettere 9ml di medium e 1 ml di sospensione cellulare ma poi mi è stato detto che nella flask vanno sempre 10 ml totali. Quindi??? Io di solito,dopo aver centrifugato risospendo con 2 ml di medium.
Vi prego,sono disperata! Sto andando avanti a fare la stessa cosa con ogni diluizione che mi viene detta ma evidentemente è sbagliato e ho paura che prima o poi se ne accorgeranno.

Giuliano652
Moderatore

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Prov.: Brescia


6911 Messaggi

Inserito il - 12 novembre 2011 : 11:28:42  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Giuliano652 Invia a Giuliano652 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
come dici tu, 1:10 vuol dire 1 ml di soluto in 10 di soluzione totale (quindi 9 di solvente), così 1:12 è 1 parte di soluto in 11 parti di solvente, 1:2 è 1 parte di soluto e 1 di solvente e così via.

La risospensione cellulare durante la tripsinizzazione non è così importante, l'importante è che tu sai quante cellule ai preso e in quanto le stai risospendendo nella flask nuova. Ad esempio se risospendi "per staccare" le cellule in 2 ml avrai il totale delle cellule a confluenza in soli 2 ml, poi se lo metti in 8 ml (per arrivare a 10) nella flask nuova avrai diluito di 1:5 il liquido, ma il numero di cellule è rimasto lo stesso perché l'hai preso tutto. Piuttosto, se diluisci "per staccare" in 10 ml e poi ne prendi 2 avrai 1/5 delle cellule di partenza che potrai mettere nella nuova flask (in cui ci saranno 8 ml per portare a volume). Ma secondo me così sprechi terreno, a meno che non si lavori con flask molto grandi meglio usare 2 ml e poi prelevare una porzione di quelli.

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Superbs
Nuovo Arrivato



6 Messaggi

Inserito il - 12 novembre 2011 : 11:46:08  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Superbs Invia a Superbs un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
perdonami,non ho ben capito. Io di solito dopo la centrifugazione per staccare il pellet dal fondo della provetta per centriguga uso 2ml di terreno. Poi ne devo aggiungere altri a seconda della diluizione o no? Io di solito a quel punto prelevo 1ml di sospensione e lo metto in una flask con altri 9ml. Faccio sempre così ma dovrà pur cambiar qualcosa a seconda della diluizione che devo fare.
So che dovrei contare le cellule ogni volta (e in quel caso sarei in grado) ma per comodità mi dicono di non farlo perchè lo scopo è solo mantenere la linea cellulare.
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Giuliano652
Moderatore

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Prov.: Brescia


6911 Messaggi

Inserito il - 12 novembre 2011 : 11:51:20  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Giuliano652 Invia a Giuliano652 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da Superbs

perdonami,non ho ben capito. Io di solito dopo la centrifugazione per staccare il pellet dal fondo della provetta per centriguga uso 2ml di terreno. Poi ne devo aggiungere altri a seconda della diluizione o no?

se ne aggiungi non cambia niente, il numero di cellule che hai rimane costante e quindi ti ritroverai con le cellule a confluenza praticamente subito
Citazione:
Io di solito a quel punto prelevo 1ml di sospensione e lo metto in una flask con altri 9ml.


quindi diluisci 1:2 la tua sospensione cellulare
Citazione:
Faccio sempre così ma dovrà pur cambiar qualcosa a seconda della diluizione che devo fare.

Sì, cambia: se ti limiti ad aggiungere terreno il numero di cellule non cambia e quindi hai di nuovo il numero di cellule della confluenza, se lo dimezzi ne hai metà
Citazione:

So che dovrei contare le cellule ogni volta (e in quel caso sarei in grado) ma per comodità mi dicono di non farlo perchè lo scopo è solo mantenere la linea cellulare.


giusto. Se non c'è bisogno di sapere il numero di cellule l'importante è diminuirne il numero (metà, un quarto, un decimo, a seconda del ritmo di crescita che dipende dal tipo di cellule) per mantenere la linea

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Superbs
Nuovo Arrivato



6 Messaggi

Inserito il - 12 novembre 2011 : 12:00:55  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Superbs Invia a Superbs un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ho capitoooo!!!![:)
Sei un grande,grazie mille,ti adoro!
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